不定胚形成促進因子に関する生物有機化学的研究

体细胞胚胎发生促进因素的生物有机化学研究

• 批准号: 07281207
• 负责人: 坂神 洋次
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07281207/
• 关键词: 不定胚; ニンジン; オーキシン; conditioned medium

植物固有の現象である不定胚形成を受精胚発生のモデルとする研究が発展してきており、また優良品種の大量繁殖法として不定胚の効率よい形成法を確立することは、重要である。本研究は、最も不定胚の研究が進んでいるニンジンを材料としてconditioned medium(CM)中に含まれる不定胚形成促進活性を示す物質を精製して、その化学的性質を明らかにする事を目的としている。ニンジン実生胚軸より高濃度のオーキシンで誘導したembriogenic callusから小細胞塊を選抜してオーキシンを含まない液体培地で培養すると不定胚が形成される。このとき高頻度で不定胚を形成する株と低頻度でしか不定胚を形成しない株とを樹立した。高頻度株から得られるCMを低頻度株に与えると不定胚形成率が上昇することが明らかになったので、このCM中に含まれる不定胚形成促進物質を低頻度株を用いた生物検定法により検出して精製することにした。活性物質の精製に先立ちその熱安定性、酸塩基に対する安定性、大まかな分子量の測定などを行った。その結果、活性物質は比較的熱に不安定であり、中性では安定なものの酸性特に塩基性で不安定なことが判明した。また透析実験からは、活性物質の分子量は3000以上と考えられた。これらのことを踏まえて、次に生物検定を行いつつ各種のクロマトグラフィーにより並列的に精製法を検討した。その結果、活性区分はDEAEセルロースに保持され、また逆相用担体であるDaiaion HP-20にも保持された。さらにゲル濾過としてはBiogelが良好な分離を示し、この結果からは活性物質の分子量は1000-2000と考えられた。この結果は、透析実験と矛盾するが、マイナスに帯電している透析膜を酸性の活性物質が透過しにくい可能性が考えられる。以上のことから活性物質は比較的低分子で酸性の水溶性物質であると結論している。

It is important to study the natural phenomena of plants, such as adventitious embryo formation, fertilization embryo development, mass propagation of fine varieties, and establishment of adventitious embryo formation rate. The purpose of this study is to further the study of adventitious embryos by refining the materials and conditioned medium(CM) containing the active materials for adventitious embryo formation and clarifying their chemical properties. The embryonic embryos were cultured in liquid medium containing high concentrations of culture medium to induce embryogenic callus to form small cell mass. The frequency of adventitious embryo formation is high and the frequency of adventitious embryo formation is low. The high frequency plants were isolated and the low frequency plants were purified. Thermal stability, acid base stability, molecular weight measurement of active substance purification precursors As a result, the active substance is relatively unstable, neutral, and acidic. The molecular weight of the active substance is 3000 or more. This is the first time that we've had a chance to do this, and we've had a chance to do this. The results showed that the activity of DEAE was maintained in the reverse phase support. The molecular weight of the active substance is 1000-2000. The result is that the dialysis membrane has the potential to transmit acidic and active substances. The above active substances are lower molecular weight than acidic water-soluble substances.