細菌の薬剤耐性プラスミド伝達に関与する性フェロモンの化学的研究

性信息素参与细菌耐药性质粒转移的化学研究

• 批准号: 61560134
• 负责人: 坂神 洋次
• 金额: $ 0.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61560134/
• 关键词: Streptococcus faecalis; 性フェロモン; テトラサイクリン耐性

細菌が薬剤耐性を獲得する過程の一つとして野性株が変異株(耐性株)から薬剤耐性プラスミドを受け取り、耐性株となることが知られており薬剤耐性菌の蔓延という大きな問題の原因となっている。本研究に使用した腸内細菌であるStreptococcus faecalisの変異株(OG1SSp(pCF-10))は、臨床的に分離された菌株で、テトラサイクリン耐性プラスミド(pCF-10)を保有している。このプラズミドは、テトラサイクリン感受性株(FA2-2(pAM351))が分泌する性フェロモン(cCF-10)により誘導される両菌の接合により伝達される。性フェロモンcCF-10の精製は、OG1SSp(pCF-10)の自己凝集活性を指標として行なった。まずFA2-2(pAM351)株の除菌培養液を順次AmberliteXAD-2,DEAE-Sephodexにより部分精製した。さらに溶媒系を変えながらODS,CNによる逆相HPLCを合計6段階行うことによりcCF-10が単離された。精製効率は、15,000万倍であり、60リットルの培養液より約4μgが得られた。OG1SSp(pCF10)株の自己凝集活活(CIA活性)においては、0.025ppbの濃度で活性を示しすでに単離されている3種の他の性フェロモンと同等の活性を示すことが確認された。本物質は、ペプチド性物質でありFAB-MSスペクトルの測定結果などから、バリン3モル,ロイシン2モル,スレオニン,フェニルアラニン各1モルからなるヘプタペプチドであると考えられた。気相式自動アミノ酸配列分析装置により配列分析を試みたが、本物質は非常に極性が低く溶媒により洗い流されてしまうために、配列分析は不調に終った。そこで現在、さらに大量の菌を培養し、多量の精製試料を得て、手動エドマン法により配列分析を行おうとしている。

The process of bacterial resistance acquisition is a gradual change from wild strains to mutant strains (resistant strains), from resistant strains to resistant strains, and from resistant strains to resistant strains. In this study, a mutant strain of Streptococcus faecalis (OG1 SSp(pCF-10)) was used to isolate and maintain the resistance of clinical isolates. The susceptible strain (FA2 -2(pAM351)) secreted the mutant gene (cCF-10), induced the mutant gene, and induced the mutant gene. Properties of cCF-10, OG1SSp(pCF-10) and self-aggregation activity index. The sterile culture medium of FA2 -2(pAM351) strain was partially purified by Amberlite XAD-2 and DEAE-Sephodex. The solvent system is composed of ODS,CN and RP HPLC. The purification rate is about 15,000 times, 60 times, and the culture medium is about 4μg. OG1 SSp(pCF10) strain self-agglutinating activity (CIA activity) was confirmed at a concentration of 0.025 ppb. This substance is FAB-MS, a selective substance, and the determination results are as follows: 1. Phase analysis equipment for automatic acid alignment analysis, the substance is very polar, the solvent is very low, the alignment analysis is not adjusted. Now, a large number of bacteria are cultured, a large number of refined samples are obtained, and a manual method is used to analyze the composition.