カテコール体ジオキシゲナーゼの補因子にはなぜ2価鉄を3価鉄の2種があるのか
为什么儿茶酚双加氧酶有两种类型的辅因子:二价铁和三价铁?
基本信息
- 批准号:08249217
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
カテコール環を開裂する二原子酸素添加酵素は,intradiol型とextradiol型とに分類される.前者は補因子として非ヘムFe^<3+>を含み,各種分光法の適用が容易であるが,extradiol型酵素は補因子が非ヘムFe^<2+>であり,可視部に吸収がなく,ESRも示さず,分子論的研究が遅れている.カテコール2,3-ジオキシゲナーゼはextradiol型の酵素で,我々はPseudomonas putida mt-2由来の本酵素遺伝子を大腸菌で大量発現させ,初めて完全なホロ酵素を得た.拮抗阻害剤であるο-ニトロフェノールとの複合体の結晶は,アセトンを安定化剤とした場合の針状とは異なり,板状であった.ο-ニトロフェノールはホロ酵素にサブユニット当たり1:1で強く結合した.その吸収スペクトルはアニオン型であり,さらに長波長領域に幅広い吸収帯が出現した.複合体の共鳴ラマンで,ニトロ基の対称伸縮振動による1334cm^<-1>のピークが1328cm^<-1>へ低波数シフトした.近赤外の900nmの吸収はニトロフェノールの結合で変化しなかった.以上から,ニトロフェノールアニオンは活性部位のFe^<2+>と電荷移動錯体を形成し,その結果,電子の局在性が高まるが,d_x^2-_y^2オ-ビタルは安定なままであることが示され,extradiol型酵素ではカテコールのLUMOの重要性が示唆された.一方,ドーパミンβ-モノオキシゲナーゼは銅依存性の一原子酸素添加酵素(4量体)であるが,低濃度DTTでサブユニット間S-S結合のみを選択的に切断できること,その際活性や4次構造には変化がないことを示した.さらにウシ副腎1個からの迅速酵素精製法を開発し,天然の変異酵素(遺伝子の多様性)を見いだした.
Diatomic acid-adding enzymes for cleavage of the ring are classified as intradiol-type and extradiol-type. The former contains Fe^<3+>, the application of spectroscopic methods is easy, the extradol type enzyme contains Fe^<2+>, the visible part absorbs Fe^<3 +>,ESR shows that molecular theory is studied. This enzyme is derived from Pseudomonas putida mt-2 and is produced in large quantities in Escherichia coli. The crystal of the complex of the antagonist is in the form of a needle or a plate. o-1:1 The absorption spectrum is different from that in the long wavelength domain. The resonance frequency of the complex is 1334 cm, the resonance frequency of the complex is 1328 cm, <-1>and the resonance frequency of the complex is 1328 cm<-1>. The absorption wavelength of 900nm near red light is reduced by the combination of absorption wavelength and absorption wavelength. As a result of the formation of Fe^<2+> and charge-transfer complexes in the active site, electron localization is highly active, d_x^2-_y^2-v is highly stable, and the importance of LUMO in extradiol-type enzymes is demonstrated. On the other hand, the activity of copper dependent mono-acid-adding enzyme (4-mer) is shown in the low concentration DTT, which is mainly due to the selective cleavage of S-S binding between copper and S-S. A rapid enzyme purification method was developed for the purification of a single fragment of the kidney, and natural heterologous enzymes (diversity of genes) were identified.
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Ishida,T.: "Selective cleavage and mudification of the intersubunit disulfide tundo of bovine dopamine β-munooxygenase" J.Biochem.120. 346-352 (1996)
Ishida, T.:“牛多巴胺 β-免疫加氧酶亚基间二硫键的选择性裂解和泥化”J.Biochem.120(1996)。
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Horiike,K.: "Stoichiometry of the water mulecules in glucore oxidation reusited." Biochem.Educ.24・(1). 17-20 (1996)
Horiike, K.:“重新利用葡萄糖核氧化中的水分子的化学计量。”Biochem.Educ.24・(1) 17-20 (1996)。
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Narita,M.: "A natural variunt of borine dopamine β-munooxygenase with phchylanine as residue 208" FEBS Lett.396. 208-212 (1996)
Narita, M.:“硼多巴胺 β-免疫加氧酶的天然变体,以苯丙氨酸作为残基 208” FEBS Lett.396 (1996)。
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