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膜電位センサーとしてのカルシウム・チャネルの構造機能相関

钙通道作为膜电位传感器的结构-功能关系

基本信息

批准号：
08268208
负责人：
五ノ井透
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.心筋・骨格筋型のK_<ATP>チャネルが、先にクローニングしたスルフォニル尿素受容体SUR1に類似のSUR2Aと内向き整流性Kチャネルの仲間のKir6.2から構成される事を生理・薬理学的実験、およびmRNA発現の組織分布の研究等により明らかにした。2.SUR1の構造・機能相関を調べる目的で、SUR1の2つのヌクレオチド結合領域(NBF-1と-2)にアミノ酸点突然変異を導入した。変異を持った8種のK_<ATP>チャネルをそれぞれ発現させ、パッチクランプ法、スルフォニル尿素結合実験、^<86>Rb^+流測定実験、共焦点顕微鏡観察により性質を調べた。NBF-1の変異では、蛋白の発現量、スルフォニル尿素結合量、機能的なチャネルの活性が、大きく減少した。NBF-2の変異では、UDPによるチャネル活性の増強作用が消失した。これらの結果は、2つのNBFが異なる役割を果たす事を示唆する。3.K_<ATP>チャネルを構成するSUR1とKir6.2分子の構成比を明らかにする目的で、SUR1の後ろにKir6.2を1つ、あるいは2つ繋いだ蛋白を発現させた。^<86>Rb^+流測定、パッチクランプ法により調べた結果4つのKir6.2と4つのSUR1がチャネルを構成すると考えた。4.SUR1とSUR2Aで構成されるK_<ATP>チャネルは、活性を阻害するATPやスルフォニル尿素の濃度、有効なチャネル開口薬の種類などが違う。これらの性質の差を決めているSURの分子内構造を探るために、SUR1とSUR2Aの分子の一部を入れ替え、^<86>Rb^+流測定実験、パッチクランプ法などによりキメラ・チャネルの性質を調べた。5.SUR1とKir6.2およびSUR2AとKir6.2によって構成されるK_<ATP>チャネルが、G蛋白によってどのような制御を受けるか調べた。両チャネルの活性はともにGi-α1で上昇し、βγサブユニットは活性に影響を与えないことがわかった。

1. The <ATP>study of physiological and biological behavior, mRNA expression and tissue distribution of cardiac muscle and skeletal muscle type K_(1) receptor SUR1, similar SUR2A and inward rectifying K_(1) receptor Kir6.2, and similar SR 2A receptor SUR 1 receptor SUR 2 A and inward rectifying K_(1) receptor Kir6.2 receptor. 2. For the purpose of adjusting the structure and function of SUR1, a sudden change in the acidity of SUR1's 2-node combination field (NBF-1 and-2) was introduced. 8 kinds of K_<ATP>C_<86>C NBF-1 is different, protein production, urea binding, functional activity, and large decrease. NBF-2 is different, UDP is different, the enhancement effect of NBF-2 activity disappears. The results of this study are as follows: 2. NBF is different from the results of this study. 3. K_C_C<ATP>_ <86>Rb^+ flow measurement," 4. SUR1 and SUR2A are composed of K_(<ATP>2), ATP, urea, urea The molecular structure of SUR1 and SUR2A was determined by the method of determining the molecular structure of SUR 1 and SUR2A<86>. 5. SUR1 to Kir6.2 and SUR2A to Kir6.2 are composed of K_<ATP>C, G_C, G_C, G両チャネルの活性はともにGi-α1で上升し、βγサブユニットは活性に影响を与えないことがわかった。