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アラニンラセマーゼのシャペロン様機能性ドメイン

丙氨酸消旋酶的分子伴侣样功能域

基本信息

批准号：
08272213
负责人：
吉村徹
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Bacillus stearothermophilus由来の耐熱性アラニンラセマーゼ(ホモ2量体)のサブユニットは、2つのドメインから構成され、N‐末端側ドメインは、補酵素ピリドキサール5'‐リン酸(PLP)が中心に位置するTIMバレル構造をもつコア部分からなり、C‐末端側ドメインの大部分はβ鎖からなる。限定分解の結果をもとに構築した断片型遺伝子の産物(断片型酵素)は、それぞれN‐末端側、C‐末端側ドメインに相当する2つのN‐,C‐断片からなるα2β2型4量体であり、酵素学的諸性質は野性型酵素のそれとほとんど差がない。本研究では、高次構造形成とドメイン構造の関係を明らかにするため、本断片型酵素の再構成過程を解析し、その高次構造形成機構を調べた。まず変性剤存在下で断片型酵素からN‐、C‐断片を分取した。希釈法によりN‐またはC‐断片を単独で折りたたませるか、あるいは、その系に変性状態のもう一方の断片を経時的に添加した。活性回復を示標にして断片型酵素の再構成を追跡したところ、C‐断片の活性回復能は経時的に失われていくのに対し、N‐断片の活性回復能は長時間保持されることが示された。断片型酵素の再構成はPLPに依存せず、その至的適pHは10.0付近であった。このpHにおいて単独で折りたたませたN‐断片は遠紫外部にのみCDを示すこと、また、励起波長280nmにおいて変性状態の場合と異なる蛍光極大を示すことから、このN‐断片は何らかの2次構造を有し、密な構造であるが、特定の3次構造はもたないと推論された。また吸収スペクトルからPLPの結合能はないものと推察された。単独で折りたたませたN‐断片に変性C‐断片を加えた場合には、N‐断片の3次構造形成が起こり、PLP結合能が回復することから、C‐断片はN‐断片の高次構造形成を補助する機能を持つと考えられる。

Bacillus stearothermophilus origin of heat resistance, heat resistance. As a result of this restriction, the products of fragment type enzymes (fragment type enzymes) are constructed from the N-terminal side and C-terminal side of the enzyme corresponding to the α2β 2-type and α2β2-type 4-type. In this study, the relationship between the formation of higher order structures and the formation of higher order structures was analyzed, and the reconstruction process of fragment enzymes was analyzed. Fragment enzymes are separated from N-and C-fragments in the presence of different enzymes. The method of "N" is to "C" and "D" is to "C". Activity recovery indicator for fragment type enzyme reconstitution-tracing, C-fragment activity recovery energy loss, N-fragment activity recovery energy long-term maintenance The recombination of fragment enzymes depends on pH 10.0. In this case, the excitation wavelength is 280nm. In this case, the excitation wavelength is 280nm. In this case, the excitation wavelength is 280nm. In this case, the excitation wavelength is 280 nm. The combination of absorption and PLP can be detected in the middle of the spectrum. In the case of N-fragment, C-fragment and N-fragment, the function of PLP binding energy is maintained and the function of PLP binding energy is maintained.