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ABCタンパク質を制御する細胞浸透性ペプチドの開発

开发调节 ABC 蛋白的细胞穿透肽

基本信息

批准号：
16658043
负责人：
吉村徹
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

ATP-binding cassette (ABC) superfamily proteinは、高等生物の細胞膜に存在し、種々の脂溶性物質のトランスポーターとして働く一方、癌細胞内に取り込まれた薬物を排出し、癌の多剤耐性の要因となるものと考えられている。本研究では、ABC superfamily proteinの一種、MDR1の阻害剤、あるいは活性化剤となるペプチドをファージディスプレイ法により検索,細胞浸透性を有するペプチド性阻害剤を開発することを目標としている。昨年度はMDR1のATPaseドメインと結合する5群のペプチド配列を提示したファージを得た。今年度は、これらのペプチドのMDR1阻害活性を検討した。ファージが呈示した配列を有する6残基のペプチド5種を固相合成法により合成し、HPLCで精製後、質量分析によりその純度を確認した。これらペプチドのMDR1のATPase活性に対する阻害効果を検討した。合成した5種類のペプチAAP1-5のうち、AAP-3が他よりも強いATPase阻害活性を示した。ATPase活性を50%阻害するのに要するペプチドの濃度は約、1mMであった。またこのペプチドは動物のアルカリフォスファターゼは阻害しなかった。なおMDR1のATPaseドメインは、リン酸のホモログであるortho-vanadateとMgイオン、およびADPとの間で不活性な複合体を作る。これをミミックする意図から、ortho-vanadate-Mgイオン-ADPの存在下でファージディスプレイを行って得られたAAP-5も、ATPase活性を阻害したが、ortho-vanadate-MgイオンーADPの効果は認められなかった。

ATP-binding cassette (ABC) superfamily protein exists in the cell membrane of higher organisms, and lipid soluble substances in species are extracted from cancer cells. In this study, a member of ABC superfamily protein, MDR1 inhibitor, and its activation agent were investigated. Last year, MDR1's ATPase list was combined with the list of 5 groups. This year, the MDR1 resistance activity of the drug was investigated. The 5 types of ligands selected from 6 residues presented in the protein were synthesized by solid phase synthesis, purified by HPLC, and their purity was confirmed by quality analysis. This paper discusses the inhibition effect of MDR1 ATPase activity in the mouse. The synthesis of 5 kinds of AAP1-5 and AAP-3 showed strong ATPase inhibition activity. ATPase activity was 50% inhibited at concentrations of about 1 mM. This is the first time I've ever seen a woman. The enzyme MDR1 is active in the presence of a complex of ortho-vanadate, Mg and ADP. AAP-5 was found to inhibit ATPase activity in the presence of ortho-vanadate-Mg and ADP.