抗体CDRのアミノ酸配列と抗原特異性の相関関係の解析

抗体CDR氨基酸序列与抗原特异性的相关性分析

• 批准号: 08272230
• 负责人: 黒澤 良和
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Fujita Health University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08272230/
• 关键词: 抗体ライブラリー; 抗原抗体反応; 抗原相補性決定領域; ファージ抗体; error-prone PCR; ステロイド抗原; 人口抗体

抗体は、HL鎖Vドメインの抗原相補性決定領域(CDR)と呼ばれる計6ケ所が形造る凸凹構造で抗原物質と安定な複合体を形成することにより抗原を特異性に認識する。このCDRのアミノ酸配列は事実上抗体毎に異なる高い多様性を示す。本研究ではそれ以外の部分(フレームワーク領域)のアミノ酸配列を一定にしたままCDRに多様な配列を導入した抗体ライブラリーの作製を行っている。抗体はFabの形でファージ膜上のcpIIIタンパクに融合した形で発現される。目的とする抗原とファージ抗体を結合させた後、ファージ粒子を回収することにより抗体遺伝子が得られる。本年度は(1)抗体としてFab、一本鎖Fv.Fvの形で発現されるベクターを作製し、相互に検討した結果、Fab型抗体が最も優れた性質を示すことが判明した。(2)抗HEL活性を示す多くの変異体の解析を行った。(3)様々なステロイド物質に対して異なる特異性を示す抗体を得てCDR配列と抗原特異性の関連を解析した。(4)H鎖CDRIIIの外側に位置する94番目の残基が抗原特異性に大きな影響を与えることを示した。(5)様々な抗原に対して特異性に結合する抗体が必ず含まれるライブラリーを作製するために6種類の抗体遺伝子を鋳型にライブラリー化できるように遺伝子を細工した。(6)error-prone PCRシステムを確立した。今後様々な抗原に対して必ず特異的に結合する抗体が含まれるライブラリーを作製するためにH鎖のCDRIIIへのランダム配列の導入-抗体単離後error-prone PCRを行い、抗原結合力の高まったクローンを得るシステムを確立する。

Antibody は, lock HL V ド メ イ ン の filling property field (CDR) antigen phase と shout ば れ る が shape made by 6 ケ る concavo-convex structure で antigen と settle な complex を form す る こ と に よ を り antigen specificity に know す る. <s:1> <s:1> CDR <e:1> ア ノ ノ acid coordination ノ the reality is that the antibody is に different なる with high <s:1> polymorphism を shows す. Beyond this study で は そ れ の part (フ レ ー ム ワ ー ク) の ア ミ ノ acid with column を certain に し た ま ま CDR に others more な match column を import し た antibody ラ イ ブ ラ リ ー の cropping を line っ て い る. Antibody でファ Fab <s:1> form でファ ジ ジ on the membrane <s:1> cpIIIタ <s:1> パ に に に fuses <s:1> た form で appears される. Purpose と す る antigen と フ ァ ー を ジ antibody combining さ せ た, フ ァ ー ジ particle を back 収 す る こ と に よ り antibody heritage 伝 sons が may ら れ る. は this year (1) antibody と し て Fab, a lock Fv. Fv の form で 発 now さ れ る ベ ク タ ー を し, mutual に beg し 検 た results, Fab antibody が も most optimum れ た nature を shown す こ と が.at し た. (2) Anti-hel activity を indicates す multiple く <s:1> variants <e:1> analysis を rows った った. (3) others 々 な ス テ ロ イ ド material に し seaborne て different な る specificity を を す antibodies to て in CDR with column と antigen specificity の masato even を parsing し た. (4) H lock CDRIII の lateral position に す る 94's mesh の residues が antigen specificity に big き な influence を and え る こ と を shown し た. (5) others 々 な antigen に し seaborne て specificity に combining す が will ず contain ま る antibody れ る ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る た め に 6 kinds の antibody heritage 伝 son を type where に ラ イ ブ ラ リ ー change で き る よ う に heritage 伝 son を fret し た. (6)error-prone PCRシステムを establish た. Future others 々 な antigen に し seaborne て will ず specific に combining す が contain ま る antibody れ る ラ イ ブ ラ リ ー を cropping す る た め に H lock の CDRIII へ の ラ ン ダ ム match column の import - antibody 単 line from the error - prone PCR を い, high antigen binding force の ま っ た ク ロ ー ン を have る シ ス テ ム を establish す る.

项目成果

Y.Akahori: "Nucleotide sequences of all the gamma gene loci of murine immunoglobulin heavy chains." Genomics. (in press).

Y.Akahori：“鼠免疫球蛋白重链的所有 γ 基因位点的核苷酸序列。”

Y.Iba: "Expression vectors for introduc tion of highly div5rged sequences into the six complementarity-determining regions of antibody." Gene. (in press).

Y.Iba：“用于将高度分化的序列引入抗体的六个互补决定区的表达载体。”

M.Seimiya: "Kinetics of binding of Antp homeodomain to DNA analyzed by measurements of surface plasmon resonance." FEBS Lett.398. 279-284 (1996)

M.Seimiya：“通过表面等离子共振测量分析 Antp 同源结构域与 DNA 结合的动力学。”

K.Miura: "Organization of the human gene for nucleobindin and its chromosomal assignment to 19q13.2-113.4." Genomics. 34. 181-186 (1996)

K.Miura：“人类核结合素基因的组织及其对 19q13.2-113.4 的染色体分配。”

Y.Kurosawa: "The immunoglobulin superfamily:where do invertebrates fit in?" Adv.Comp.Envir.Physiol.23. 151-184 (1996)

Y.Kurosawa：“免疫球蛋白超家族：无脊椎动物适合哪里？”