EBウイルス複製起点における宿主複製開始因子複合体の機能

EB病毒复制起点宿主复制起始因子复合物的功能

• 批准号: 08277206
• 负责人: 白形 正樹
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08277206/
• 关键词: DNA複製; EBウイルス; 複製因子

縮主ゲノム複製起点に類似した機能を持つEBウイルスの複製起点oriPをモデルに用いて複製開始とその制御機構の解明をめざし、ウイルス複製因子EBNA1がoriPで形成する複合体に含まれる宿主複製開始因子を同定し、細胞周期に依存して受ける制御機構を明らかにすることを目的とした。OriPによる複製は1細胞周期あたり約1回とする結果が報告されているが、これがoriPの複製効率が単に低いためなのか、あるいは細胞ゲノムと同様の制御を受けているのかは不明であった。そこでoriPを細部に導入後、nocodazoleを用いて細胞周期の進行をM期で阻止し、最初のS期に起こる複製を調べた。その結果最初のS期でDNAはすでに核内に存在していたものの、oriPからの複製はほとんど行われないことが明らかになった。Nocodazoleを培地から除き、再び細胞周期を進行させ、M期を通過しG1からS期へと移行させると、今度は複製が行われた。これらの結果からoriPから複製が開始されるには一度M期を通過することが必要であること、したがってoriPはライセンシング制御を受けていることが明らかになった。さらに、最小oriP領域からの複製もライセンシング制御を受けており、ライセンシング制御は特定の塩基配列を必要とはせずにEBNA1が形成する複合体を介して行われていると考えられた。次にEBNA1と特異的に結合する細胞因子を単離するために、ヒスチジンのタグを付加したEBNA1を発現させたHeLa細胞を作成し大量培養し、キレ-ティングクロマトグラフィー法によりEBNA1-複合体を精製することを試みている。またライセンシングに関わるMCM因子が直接EBNA1と結合することも考えられる。この可能性を検討する実験を行うことが今後必要である。

Shrink primary ゲ ノ ム copy starting point に similar し た function を hold つ EB ウ イ ル ス の copy starting point oriP を モ デ ル に with い て duplicate と そ の system royal institution の interpret を め ざ し, ウ イ ル ス replicator EBNA1 が oriP で form す に contain ま る complexes れ る host with duplicate factor を し, cell cycle に dependent し て by け る suppression machine The purpose of を statement ら とを にする とを とを is と た た. OriP に よ る copy は 1 cell cycle あ た り about 1 back と す る results が reports さ れ て い る が, こ れ が OriP の copy working rate が 単 に low い た め な の か, あ る い は cells ゲ ノ ム と with others の suppression を by け て い る の か は unknown で あ っ た. そ こ で oriP を detail に after import, nocodazole を with い て cell cycle の を stage M で stop し, initially の S に up こ る copy を adjustable べ た. そ の results initially の S period で DNA は す で に nuclear に exist within し て い た も の の, oriP か ら の copy は ほ と ん ど line わ れ な い こ と が Ming ら か に な っ た. Nocodazole を petty か ら except き, again び cell cycle を さ せ, M phase を through し G1 か ら S period へ と transitional さ せ る と line, this degree は duplicate が わ れ た. こ れ ら の results か ら oriP か ら copy が began さ れ る に は once M periods を by す る こ と が necessary で あ る こ と, し た が っ て oriP は ラ イ セ ン シ ン グ suppression を by け て い る こ と が Ming ら か に な っ た. さ ら に, minimum oriP か ら の copy も ラ イ セ ン シ ン グ suppression を by け て お り, ラ イ セ ン シ ン グ suppression は specific の salt base with column を necessary と は せ ず に EBNA1 が form す る complex を interface し て line わ れ て い る と exam え ら れ た. Time に EBNA1 と specific に combining す る cytokines を 単 from す る た め に, ヒ ス チ ジ ン の タ グ を plus し た EBNA1 を 発 now さ せ た HeLa を made し mass culture し, キ レ - テ ィ ン グ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー method に よ り EBNA1 - complex を refined す る こ と を try み て い る. ま た ラ イ セ ン シ ン グ に masato わ る MCM factor が directly EBNA1 と combining す る こ と も exam え ら れ る. <s:1> possibilities を検 seek する experiments を conduct う とが とが necessary in the future である.

项目成果

白形正樹: "ヘルペスウイルスの分子進化" ウイルス. 46. 43-48 (1996)

Masaki Shirakata：“疱疹病毒的分子进化”病毒。 46. 43-48 (1996)