末端酸化酵素の基質酸化特異性とプロトンポンプにおける金属活性中心の役割

末端氧化酶的底物氧化特异性和金属活性中心在质子泵中的作用

• 批准号: 09235228
• 负责人: 曽根 のぶ史
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09235228/
• 关键词: シトクロムオキシダーゼ; キノールオキシダーゼ; シトクロムc-551; プロトンポンプ; ヘムO; Bacillus stearothermophilus; キメラ酵素; 塩基配列決定

1。ヘム-銅オキシダーゼにはキノールを酸化するものとシトクロムcを酸化するものがある。その特異性を分子論的に考察する目的で、大腸菌のbo型キノールオキシダーゼのサブユニットIIの親水性ドメインを好熱菌シトクロムcオキシダーゼの対応する部分で入れ換えたキメラ酵素の遺伝子をプラスミド上に作成した。これをbo型およびbo型両方のキノールオキシダーゼを欠く大腸菌で発現させた所、遅いながら大腸菌は好気的に増殖した。これからキノールオキシダーゼとTMPDシトクロムcオキシダーゼの双方の活性を持つ膜をとることができた。2。好熱性バシラスで主に働く末端酸化酵素はcaa_3型シトクロムc酸化酵素である。しかしオルタナティブオキダーゼとしてヘムBとOのほか少量のヘムAが含まれているb(o/a)_3型酸化酵素はこの菌のシトクロムc-551を高い親和性で速く酸化することができる。この酵素は2つのサブユニット(56と20kDa)からなるが、そのブユニットIIには古細菌Sulfolobusで同定されたSoxABCDキノール酸化酵素のそれとともに膜貫通α-ヘリックスが1本しかなく、独自のサブグループを形成する。3。より低い酸素分圧で働くヘム銅オキシダーゼとしてcb型の酵素がある。Helicobacter pyloriではこの酵素が唯一の末端酸化酵素であることを見いだし、この酵素の精製した。4。好熱性バシラスのシトクロムc-551を枯草菌で発現するようにデザインされたプラスミドで枯草菌を形質転換したところ、好熱性バシラスのシトクロムc-551が約2.5nmol/mg程度発現した。

1。The first step is to change the color of the film. For the purpose of investigating the specificity of molecular theory, the type of E. coli and the hydrophilicity of E. coli were studied. This is the first time that a person has ever been infected with E. coli. The vitality of both parties will be maintained and maintained between this. 2。The main activity of this enzyme is terminal acidifying enzyme caa_3. A small amount of B(o/a)_3-type acidifying enzyme was found to have a high affinity for c-551. The enzyme is composed of two kinds of enzyme (56 kDa and 20kDa), namely, Sulfolobus II, SoxABCD II, and so on. 3。The enzyme of low acid content Helicobacter pylori is a unique terminal acidifying enzyme. 4。C-551, a thermophilic microorganism, was found at about 2.5 nmol/mg.

项目成果

Kai,K.,Noguchi,S.and Sone,N.: "Over-expression and post-translational modification of thermophilic Bacillus cytochrome c-551 in Bacillus subtilis.J.Ferm.Bioenginer.84," J.Ferm.Bioenginer.84・3. 190-194 (1997)

Kai, K.、Noguchi, S. 和 Sone, N.：“枯草芽孢杆菌中嗜热芽孢杆菌细胞色素 c-551 的过度表达和翻译后修饰。J.Ferm.Bioenginer.84”，J.Ferm.Bioenginer。 84・3。190-194（1997）

Yaginuma,A.,Tsukita,S.,Sakamoto,J.and Sone,N.: "Characterization of two terminal oxidase in Bacillus brevis and efficiency of energy conservation of the respiratory chain." J.Biochem.122・5. 969-976 (1997)

Yaginuma, A.、Tsukita, S.、Sakamoto, J. 和 Sone, N.：“短芽孢杆菌两端氧化酶的特征和呼吸链能量守恒的效率。”J.Biochem.122・5。 976 (1997)

Sakamoto,J.,Handa,Y.and Sone,N.: "A novel cytochrome b(o/a)3-type oxidase-type from Bacillus stearothermophilus catalyzes cytochrome c-551 oxidation." J.Biochem.122・4. 764-771 (1997)

Sakamoto, J.、Handa, Y. 和 Sone, N.：“一种来自嗜热脂肪芽孢杆菌的新型细胞色素 b(o/a)3 型氧化酶催化细胞色素 c-551 氧化。J.Biochem.122・4。” 764-771 (1997)

Uchida,A.,Kusano,T.Mogi,T.,Anraku,Y.and Sone,N.: "Expression of Escherichia coli bo-type ubiquinol oxidase with a chimeric subunit II having t CuA-cytochrome c domain from the thermophilic Bacillus caa3-type cytochrome c oxidase" J.Biochem.122・5. 1004-100

Uchida, A.、Kusano, T. Mogi, T.、Anraku, Y. 和 Sone, N.：“大肠杆菌 bo 型泛醇氧化酶与具有来自嗜热芽孢杆菌的 t CuA-细胞色素 c 结构域的嵌合亚基 II 的表达caa3型细胞色素c氧化酶”J.Biochem.122・5.1004-100

Ishimura,Y.,Sone,N et,al: "Oxygen homeostasis and its dynamics" Springer,Tokyo, 620(112-119) (1998)

Ishimura,Y.,Sone,N 等人：“氧稳态及其动态” Springer,Tokyo, 620(112-119) (1998)