機械的刺激によって活性化されるCI-チャネルの同定と機能解析

机械刺激激活的 CI 通道的识别和功能分析

• 批准号: 09257243
• 负责人: 古家 喜四夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09257243/
• 关键词: 乳腺; 分泌上皮細胞; ヌクレオチド放出; 細胞内カルシウム; 機械的刺激; カルシウム波; ATP受容体; クロライドチャネル

最近私たちは乳腺の腺胞の培養を用い、筋上皮細胞の収縮が分泌上皮細胞への機械的刺激となりATP,UTPなどのヌクレオチドが放出され、周りの細胞のプリン受容体を活性化することによって細胞間を伝播するカルシウム波が発生するを明らかにした。この機械的刺激によってヌクレオチドが放出されるメカニズムを探るためパッチクランプ下で機械的刺激を与えた結果CIチャネルの活性化がみられた。本研究はこの機械的刺激によって活性化されるCI-チャネルの同定と機能解析が目的であった。まずCI-チャネルの各種ブロッカーのなかでカルシウム波の発生あるいは伝播を阻害するものを検索した。fura 2をロードした乳癌細胞にカルシウム蛍光測光下で機械的刺激を与え各種薬物の効果を見たところDIDS,9AC,DPC,glibenclamideなどはカルシウム波の発生、伝播に大きな影響は与えなかったが、niflumic acidは高濃度(1mM)ではそれらを抑制した。niflumic acidは機械的刺激によって活性化されるCI-電流を抑制した。また、UTPの投与によって起こるATP分泌も抑制した。これらの結果はniflumic acid感受性のCI-チャネルがATPの放出に関与している可能性を示唆した。しかしもう1つの可能性としてniflumic acidがATP受容体に作用していることも考えられた。実際niflumic acid 1mM存在下ではATPによるCa^<2+>反応が抑制された。抑制の濃度依存性を考慮するとATP受容体への作用の方が可能性が強いと現在考えている。CICファミリーの遺伝子配列を使ったRT-PCRによる解析では、乳癌細胞にCIC-3が発現していることは示されたが、その他の種類のCI-チャネルについてはまだ不明であり、電気生理的に見いだされているCI-電流との関係はまだついていない。

Recently, the development of cellular communication between mammary gland cells and secretory epithelial cells has been demonstrated by mechanical stimulation of ATP,UTP and cellular receptor activation. The mechanical stimulation of this kind is to release the active substances from the brain. The purpose of this study is to analyze the function of CI-C-R in response to mechanical stimulation. All kinds of CI-C products are produced in different ways. Fura 2 can be detected in breast cancer cells under light and mechanical stimulation, and the effects of various substances such as DIDS,9AC,DPC, glibenamide can be detected in breast cancer cells under high concentration (1mM). Niflumic acid inhibits the activation of CI-currents due to mechanical stimulation. ATP secretion is inhibited by UTP and ATP release. These results indicate the relationship between ATP release and the possibility of ATP release. The possibility of niflumic acid acting on ATP receptors In the presence of niflumic acid 1mM, ATP was inhibited by Ca^<2+>. Consideration of the concentration-dependence of inhibition and the possibility of the role of ATP receptors are strongly examined. CIC-3 is detected in breast cancer cells by RT-PCR analysis, and other types of CIC-3 are detected by RT-PCR analysis.

项目成果

Furuya K et al: "Purinergic and mechanical interactions between myo-and secretory epithelial cells in mammary gland" Jpn.J.Physiol.47(S1). S62 (1997)

Furuya K 等人：“乳腺肌细胞和分泌上皮细胞之间的嘌呤能和机械相互作用”Jpn.J.Physiol.47(S1)。

Furuya K et al: "ATP receptors mediating interaction in mammary epithelial cells." Jpn.J.Physiol.47. S24 (1997)

Furuya K 等人：“ATP 受体介导乳腺上皮细胞中的相互作用。”

Nakano H, Furuya K et al.: "Involvement of P2-purinergic receptor in intracellular calcium responses and the contraction of mammary myoepithelial cells." Pflugers Archiv. 435. 1-8 (1997)

Nakano H、Furuya K 等人：“P2 嘌呤能受体参与细胞内钙反应和乳腺肌上皮细胞的收缩。”

Nakano H, Furuya K et al: "Calcium signaling and electrical properties of mammary myoepithelial cells." Jpn.J.Physiol.47. S60 (1997)

Nakano H、Furuya K 等人：“乳腺肌上皮细胞的钙信号传导和电特性。”