ウイルスベクターによるグルタミン酸レセプター機能の変換が神経細胞死に与える影響

病毒载体诱导的谷氨酸受体功能转化对神经细胞死亡的影响

• 批准号: 09260207
• 负责人: 小澤 瀞司
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09260207/
• 关键词: カルシウム透過性; AMPAレセプター; 細胞死; Q; R部位; GluR2; アデノウイルス; lexP配列; 海馬ニューロン

本研究では、ウイルスベクターを用いた遺伝子導入法を利用して、Ca^<2+>透過性AMPAレセプター(AMPAR)を神経細胞に過剰に発現させ、これが細胞死を促進するか否かを検討することを計画した。このために、AMPARのCa^<2+>透過性を決定するサブユニットであるGluR2のQ(グルタミン)/R(アルギニン)部位をRからQに置換したミュータント(GluR2Q)をアデノウイルスベクターに組み込むことを試みた。実験では、Cre組換え酵素発現アデノウイルス(AxCANCre)とGluR2Q発現用アデノウイルス(AxCALNLGluR2Q)を作製した。AxCALNLGluR2QにはCAGプロモーター、loxP配列、stuffer遺伝子、polyAシグナル第二のloxP配列、GluR2QcDNA、第二のpolyAシグナルを組み込んだ。AxCALNLGluR2QのHEK293細胞内での増殖過程では、stuffer遺伝子とpoly Aシグナルがプロモーターと目的遺伝子の間に介在するために目的タンパク質は発現しないが、AxCANCreとAxCALNLGluR2Qを共感染させると、Cre組換え酵素によりloxP配列に挟まれたstuffer遺伝子とpolyAシグナルの部分が切り落とされ、GluR2Qの発現が可能となる。PC12細胞をこれらのウイルスで共感染させたところ、全ての細胞で高いCa^<2+>透過性をもつAMPARを発現させることができた。次いでこの組換えアデノウイルスをラット培養海馬ニューロンに感染させ、本来Ca^<2+>透過性をもたないAMPARのみを発現する錐体ニューロンに、高効率にCa^<2+>透過性AMPARを発現させることができた。現在、ラットの海馬CA1野にこの組換えアデノウイルスを注入し、錐体ニューロンにCa^<2+>透過性AMPARを過剰に発現させ、その細胞死に対する影響を検討中である。

In this study, we plan to explore the use of the gene introduction method for the detection and promotion of cell death in neurons by Ca^<2+> permeable AMPA receptor (AMPAR). The Ca^<2+> permeability of AMPAR is determined by the Q (R)/R(R) component of GluR2. The Q (R) component of GluR2 is replaced by the Q (R) component of GluR2. Cre group enzyme production failure (AxCANCre) and GluR2 Q production failure (AxCALNLGluR2 Q) AxCALNLGluR2Q is composed of CAG, loxP, stuffer, polyA, second loxP, GluR2Q cDNA and second polyA. AxCANCre AxCALNLGluR2Q co-infection with AxNLGluR2Q, Cre constitutive enzyme loxP alignment with stuffer gene and poly A, GluR2Q development is possible. PC12 cells are infected with high Ca^<2+> permeability and AMPAR is detected. In the second half of the year, the group of cells was infected with AMPAR, which was originally Ca^<2 +> permeable. Now, the effects of CA1 field component replacement on the development of CA2 +-permeable AMPAR and cell death are discussed.

项目成果

Koike,M.et al.: "Blocking effect of 1-naphthyl acetyl spermane on Ca^<2+>-permeable AMPA receptors in cultured rat hippocampal neurons." Neurosci.Res.29. 27-36 (1997)

Koike,M.et al.：“1-萘基乙酰精烷对培养的大鼠海马神经元中 Ca^2-通透性 AMPA 受体的阻断作用。”

Sudo,M.et al.: "Adenovirus-mediated expression of AMPA-type glutamate receptor channels in PC12 cells." Mol.Brain Res.50. 91-99 (1997)

Sudo,M.et al.：“腺病毒介导的 PC12 细胞中 AMPA 型谷氨酸受体通道的表达。”

Itazawa,S.et al.: "Inwardly rectifying and Ca^<2+>-permeable AMPA-type glutamate receptor channels in rat neocortical neurons" J.Neurophysiol.78. 2592-2601 (1997)

Itazawa，S.et al.：“大鼠新皮质神经元中的内向整流和Ca^2-可渗透的AMPA型谷氨酸受体通道”J.Neurophysiol.78。

都筑馨介: "単一ニューロンのmRNA解析" 日本生理学会雑誌. 59. 301-314 (1997)

Keisuke Tsuzuki：“单个神经元的 mRNA 分析”日本生理学会杂志 59. 301-314 (1997)。