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単一細胞バイアビリティイメージング

单细胞活力成像

基本信息

批准号：
11227201
负责人：
末永智一
金额：
$ 99.52万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は以下の結果を得た。(1)マイクロスタンプ法などによって,単一細胞レベルで細胞を配列させることができた。電気化学顕微鏡による呼吸量計測によるバイアビリティイメージングを行い,細胞パターンの形状が細胞活性に与える影響を調べた。また,心筋細胞のパターンにおけるギャップ結合の活性についても薬理学的な応答を評価することができた。(2)バリノマイシンの添加に伴ってE.coli細胞の膜内外にカリウム拡散電位が形成され、蛍光強度が増大して行く様子が,Bis-oxonol型の膜電位感受性色素であるDiBAC_4(3),および共焦点レーザー顕微鏡を用いて観測できた。また,脂質の再構成膜小胞を作製して膜内外のpHを^<31>P核磁気共鳴で観測することも試み,脂質にコレステロールを加えて作製した膜小胞では、膜内外のpH差が観測され、それが24時間以上持続できることが明らかとなった。(3)光トラップで好中球内顆粒を捕捉したのち,トラップの中心を1秒間矩形波状に100nm変位させ,顆粒の動きを4分割光ダイオードで分析した。また,毒素タンパク質1ukFとHSのシステインミュータントを作成し,そのシステインに蛍光をラベルした.この毒素タンパク質と血球を反応させて,タンパク質の膜上での集合の様子を,1分子蛍光観察から決定した.(4)サクラマスの魚卵について,受精,孵化,ストレス負荷時における生体内酸化還元機能および形態変化の情報を得るために,in vivo ESR計測および,in vivo Optical Coherent Tomography (OCT)計測を行った。ポータブルESR装置を飼育現場に搬入して測定を行ったところ,正常卵のみに呼吸に起因すると考えられるスピンプローブ剤のESR信号強度がリズムを刻んで増減する現象を捉えることができた。

The following results were achieved during the year. (1)A cell is a cell. The shape of cells and the effect of cell activity are modulated by electrochemistry microscopy. In addition, the activity of the muscle cells in the heart is evaluated. (2)In E.coli cells, the membrane potential-sensitive pigment of Bis-oxonol type was detected by confocal microscopy. In addition, lipid remodeling of membrane vesicles was carried out for more than <31>24 hours, and pH difference between inside and outside the membrane was measured by NMR. (3)The light source captures the particles in the sphere, and the center of the light source moves to 100nm in 1 second. The particle movement is divided into 4 segments. In addition, the toxin can be used as a substance, and the HS can be used as a substance. This toxin is determined by the fluorescence detection of a molecule. (4)Fish eggs, fertilization, hatching, ovaries,in vivo ESR measurement,in vivo Optical Coherent Tomography (OCT) measurement. The ESR signal intensity of the normal eggs was measured at the breeding site.