酸化ストレスを伴う哺乳類細胞の生物学的系における抗酸化分子とチロシンキナーゼ

氧化应激哺乳动物细胞生物系统中的抗氧化分子和酪氨酸激酶

• 批准号: 12147202
• 负责人: 丸 義朗
• 金额: $ 20.16万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University (2002-2004)The University of Tokyo (2000-2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12147202/
• 关键词: 活性酸素; チロシンキナーゼ; Nox; 血管内皮細胞; 卵細胞; 金属; 血管; 活性酵素; PAI-1; HSC70; エンドサイトーシス; 金属蛋白; Nox1; CD2AP; VEGF; Flt-1; ABL; 癌細胞; THIIH; PKC; メタロプロテアーゼ; HBP23; 2原子分子

(1)直接的に活性酸素の産生に関与する分子である古典的なNADPHオキシダーゼ複合体は現在Nox2と命名されており、これと相同性を有する分子が複数同定されている。その一つであるNox1が肝臓の類洞の内皮細胞で発現していることを見い出した。同細胞の初代培養では血管内皮細胞増殖因子(VEGF)依存性の細胞増殖を認めるが、Nox1はこれと平行して転写を介した発現上昇を示した。これに対して、Nox2の発現はmRNAのレベルで変化を認めなかった。ところがNox1自体の生物学的活性は逆説的にも細胞死であり、そのsiRNAや活性酸素のスカベンジャーなどの投与でVEGF抵抗性の細胞死は回復した。すなわち転写が誘導されたNox1の活性はVEGFの活性と拮抗するものであった。さらに、Nox1を肝類洞の内皮細胞株で過剰発現させるとマトリゲル上で毛細血管様のネットワークを形成した。この現象も抗酸化作用を有する化学物質で抑制された。興味あることにVEGF受容体の恒常的活性化型を発現させると管腔形成が認められるのみ対し、Nox1のそれは管腔を形成していなかった。(2)受精時に活性酸素が関与することは古くから知られている。我々はマウス卵細胞ではNox2が中心的に発現していることを見い出した。さらにウニ卵でNox相同性遺伝子を探索し、新規Nox遺伝子Nox-U1を発見した。遺伝子進化論的にはNox2からはむしろ分岐し、Nox4やNox5に近縁な遺伝子であることも報告した。FADやNADPHの結合に関与する領域、膜貫通部分などは極めてよく保存されていた。現在抗体を作成し、受精への関与を研究中である。

(1)The classical NADPH complex is related to the production of direct active acids. Nox1 is a cavity-like endothelial cell in the liver. In primary culture of the same cells, vascular endothelial growth factor (VEGF)-dependent cell proliferation was recognized, and Nox1 expression was increased. The expression of Nox2 mRNA was detected by PCR. The biological activity of Nox1 is reversed by cell death, siRNA and VEGF resistance. The activity of Nox1 is induced by the enzyme and the activity of VEGF is antagonized. Nox1 and Nox1 were found in endothelial cell lines of liver cavitations. This phenomenon is inhibited by chemical substances that act against acidification. The constant activation pattern of VEGF receptor was observed and the lumen formation of Nox1 was observed. (2)When fertilization occurs, active hormones are involved. The egg cell is Nox2, and the egg cell is Nox2. The new Nox gene Nox-U1 has been discovered. Nox2, Nox5, Nox 6, Nox 7, Nox 8, Nox 9, Nox 9, Nox FAD and NADPH binding are related to the domain, membrane penetration, and preservation. Now the antibody is made, fertilized and studied

项目成果

Maru,Y.: "Use of glutathione S-transferase (GST) as an artificial dimerization domain to activate oncogenes that require multimerization."Methods in Enzymology. 327. 429-440 (2000)

Maru,Y.：“使用谷胱甘肽 S-转移酶 (GST) 作为人工二聚化结构域来激活需要多聚化的癌基因。”酶学方法。

Kobayashi, S et al.: "The c-Cbl/CD2AP complex regulates VEGF-induced endocytosis and degradation of Flt-1 (VEGFR-1)"FASEB J.. (in press). (2004)

Kobayashi, S 等人：“c-Cbl/CD2AP 复合物调节 VEGF 诱导的内吞作用和 Flt-1 (VEGFR-1) 的降解”FASEB J..（出版中）。

Kin, Y., Shibuya, M., Maru, Y.: "Inhibition of protein kinase C δ has negative effect on anchorage-independent growth of BCR-ABL-transformed Rat1 cells"Leukemia Res.. 25. 821-825 (2001)

Kin, Y.、Shibuya, M.、Maru, Y.：“蛋白激酶 C δ 的抑制对 BCR-ABL 转化的 Rat1 细胞的贴壁独立生长具有负面影响”白血病研究 25. 821-825 (2001 ）

Maru,Y.,Hirosawa,H.,and Shibuya,M: "An oncogenic form of the Flt-1 kinase has a tubulogenic potential in a sinusoidal endothelial cell line."Eur.J.Cell.Biol.. 79. 130-143 (2000)

Maru,Y.、Hirosawa,H. 和 Shibuya,M：“Flt-1 激酶的致癌形式在窦内皮细胞系中具有肾小管形成潜力。”Eur.J.Cell.Biol.. 79. 130-

Maru, Y., K.Hanks, S.K., Shibuya, M.: "The tubulogenic activity associated with an activated form of Flt-1 kinase is dependent on focal adhesion kinase"Mol. Cell Res., Biochim. et Biophy. Acta. 1540. 147-153 (2001)

Maru，Y.，K.Hanks，S.K.，Shibuya，M.：“与 Flt-1 激酶的激活形式相关的管形成活性依赖于粘着斑激酶”Mol。