腫瘍の特異的標的化を目指した遺伝子治療法の開発

开发针对特定肿瘤靶向的基因治疗方法

• 批准号: 12217123
• 负责人: 濱田 洋文
• 金额: $ 60.67万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12217123/
• 关键词: 膵癌; 悪性黒色腫; 悪性神経膠腫; B細胞系の腫瘍; 前立腺癌; モノクローナル抗体; 遺伝子治療; アデノウルスベクター; アデノウイルス; ファイバー変異型; がん治療; 分子標的; モノクローン抗体; NG2; 口腔癌; 膀胱癌; 安全性評価; アデノウイルスベクター; 悪性脳腫瘍; 受容体; ペプチドリガンド; がん; ファイバー

腫瘍に対する選択的標的化の候補分子を探索するために、抗体のFcドメインに結合するProtein AのZ33モチーフをAd5ファイバーのHIループに持つAdv-FZ33アデノウイルスを作成した。CARをほとんど発現しないヒト膵癌細胞AsPc1やヒトメラノーマ細胞A375に対する遺伝子導入効率をEGFPないしb-gal遺伝子発現で測定した。AsPc1やA375に発現する表面分子(CD29、CD54など)に対する抗体を付着させたAdv-FZ33による遺伝子導入・遺伝子発現は、コントロール(抗体の非存在下またはコントロールIgG併用でのAdv-FZ33、ならびに野生型Ad5ファイバーAdv-Fwtのウイルス)による遺伝子導入・発現の数十倍に増強できた。また、ErbB2を高発現するヒト卵巣癌細胞(SK-OV3など)への遺伝子導入は、ErbB2抗体の併用により、選択的に著明に(EGFP遺伝子導入細胞%で、5%から90%へ)増強できた。腫瘍細胞とZ33アデノウイルスとを架橋することによって遺伝子導入効率が高まるモノクローナル抗体をスクリーニングすることにより、腫瘍細胞に対して標的化の可能な表面分子と抗体の組み合わせの探索を開始している。先行しているヒト膵癌を標的化できる新規抗体作製のプロジェクトでは、すでに4種類の抗体産生ハイブリドーマが樹立されている。このうちの一つクローンA^*によって得られるモノクローナル抗体は、AdvFZ33アデノウイルスの膵癌細胞AsPc1への遺伝子導入効率を、非常に強く(200倍)増強し、有望である。

Swollen sores に す seaborne る sentaku targets of molecular を の alternate exploration す る た め に, antibody の Fc ド メ イ ン に combining す る Protein A の Z33 モ チ ー フ を Ad5 フ ァ イ バ ー ル の HI ー プ に hold つ Adv - FZ33 ア デ ノ ウ イ ル ス を made し た. CAR を ほ と ん ど 発 now し な い ヒ ト Cui cancer AsPc1 や ヒ ト メ ラ ノ ー マ A375 cells に す seaborne る posthumous son 伝 import working rate を EGFP な い し b - gal heritage 伝 son 発 で determination now し た. AsPc1 や A375 に 発 now す る surface molecules (CD29, CD54 な ど) に す seaborne る antibody を pay the さ せ た Adv - FZ33 に よ る posthumous son 伝 import, heritage 伝 発 は now, コ ン ト ロ ー ル (the presence of antibodies の non ま た は コ ン ト ロ ー ル IgG and で の Adv - FZ33, な ら び に wild-type Ad5 フ ァ イ Youdaoplaceholder0 バ Adv-Fwt ウ ウ ウ ス ス)による derivative 伝 import · occurrence <s:1> tens of times に enhancement で た た た. High ま た, ErbB2 を 発 now す る ヒ ト eggs 巣 cancer cells (SK - OV3 な ど) へ の heritage 伝 import は, の ErbB2 antibody and に よ り, sentaku に zhao Ming に (EGFP heritage 伝 で import cell %, 5% か ら へ 90%) raised strong で き た. Swollen sores cells と Z33 ア デ ノ ウ イ ル ス と を bridging す る こ と に よ っ て heritage 伝 son import high rate of unseen が ま る モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody を ス ク リ ー ニ ン グ す る こ と に よ り, swollen sores cell に し seaborne て mark the の may な surface molecules と antibody の group み close わ せ の explore を began し て い る. First し て い る ヒ ト Cui carcinoma を mark the で き る antibody of new rules for making の プ ロ ジ ェ ク ト で は, す で に 4 kinds の antibodies ハ イ ブ リ ド ー マ が set さ れ て い る. A つ こ の う ち の ク ロ ー ン A ^ * に よ っ て have ら れ る モ ノ ク ロ ー ナ は ル antibody, AdvFZ33 ア デ ノ ウ イ ル ス の Cui cancer AsPc1 へ の heritage 伝 を import services rate, very strong に く raised strong し (200 times), is expected to be で あ る.

项目成果

Yamamoto S., et al., Hamada, H.: "Reduced transduction efficiency of adenoviral vectors expressing human p53 gene by repeated transduction into glioma cells in vitro"Clinical Cancer Res.. (In press). (2002)

Yamamoto S., et al., Hamada, H.：“通过体外重复转导到神经胶质瘤细胞中，表达人 p53 基因的腺病毒载体的转导效率降低”Clinical Cancer Res..（正在出版）。

Tsuda H, et al., Hamada H.: "Efficient BMP2 gene transfer and bone formation of mesenchymal stem cells by a fiber-mutant adenoviral vector"Mol. Ther.. 7(2). 1-12 (2003)

Tsuda H 等人，Hamada H.：“通过纤维突变腺病毒载体实现间充质干细胞的高效 BMP2 基因转移和骨形成”Mol。

Shinoura N, Sakurai S, Asai A, Kirino T, Hamada, H.: "Caspase-9 transduction overrides the resistance mechanism against p53-mediated apoptosis in U-87MG glioma cells"Neurosurgery. 49(1):. 177-86 (2001)

Shinoura N、Sakurai S、Asai A、Kirino T、Hamada、H.：“Caspase-9 转导克服了 U-87MG 胶质瘤细胞中针对 p53 介导的细胞凋亡的抵抗机制”神经外科。

Dehari H.et al., Hamada H.: "Enhanced antitumor effect of RGD fiber-modified adenovirus for gene therapy of oral cancer."Cancer Gene Therapy. 10(1). 75-85 (2003)

Dehari H.等人，Hamada H.：“RGD纤维修饰腺病毒在口腔癌基因治疗中的增强抗肿瘤作用。”癌症基因治疗。

Shinoura,N., et al.and Hamada,H.: "Adenovirus-mediated transfer of caspase-8 augments cell death in gliomas : Implication for gene therapy."Human Gene Ther.. 11. 1123-1137 (2000)

Shinoura,N., et al. 和 Hamada,H.：“腺病毒介导的 caspase-8 转移增强神经胶质瘤中的细胞死亡：对基因治疗的意义。”人类基因疗法.. 11. 1123-1137 (2000)