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酵素免疫測定法の高感度化を目的とした分子シンクロナイゼーション系の構築と応用

提高酶联免疫分析灵敏度的分子同步系统的构建及应用

基本信息

批准号：
13022236
负责人：
井上國世
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒスタミン(HA)は神経伝達、胃液分泌、アレルギー反応に関与する生理活性アミンであり、食品衛生においては魚の鮮度マーカーである。分子シンクロナイゼーション系を組み込んだHAの高感度酵素免疫測定法EIAの構築を検討した。HAに対するモノクローナル抗体AHA2を獲得し、AHA2とHAとの相互作用を表面プラズモン共鳴法により解析した。AHA2の作出に用いた抗原HA-GA-BSAとAHA2との相互作用解離定数Kdは1nMであるが、HAとのKdは1μMであった。この差異はAHA2がHAと架橋剤GAとの結合部位をも認識する結果であると考えられた。HAにGAを共有結合させたHA-GAに対するAHA2の結合力は、HAに対する結合力に比べてl00倍増大したが、HA-GA-BSAの結合力に比べてかなり弱かった。AHA2と各種HA類縁体[His,α-methyl His,1-methylHA,3-methylHA, GABA]との交差反応性を検討した。AHA2はこれら類縁体とほとんど相互作用を示さなかった。一方、昨年度開発した3酵素反応シンクロ系を改良して、化学発光検出系を用いる4酵素系を構築した。ALP(酵素1)標識した第2抗体によりNADPからNADを生成させ、第2酵素ADHによりNADをNADHに変換する。ついで第3酵素NHRによりNADHをNADに変換するとともにFMNをFMNH_2に還元する。FMNH_2は第4酵素ルシフェラーゼによりFMNに変換されるが、このとき脂肪酸アルデヒドが脂肪酸に変換され化学発光を発する。以上のシンクロ系の最適化を検討し、ほぼ応用できる条件を見出すことができた。

Food hygiene, food hygiene A Study on the Construction of High Sensitivity Enzyme Immunoassay EIA for HA The interaction between HA and AHA2 was analyzed by resonance method. AHA2 makes use of HA-GA-BSA and AHA2 to interact with each other. Kd is 1nM, HA is 1μM. The difference between HA 2 and GA is recognized. The binding force of HA to GA was 100 times higher than that of HA to BSA, and the binding force of HA to GA was weaker than that of BSA. AHA2 and HA analogues [His,α-methyl His,1-methylHA,3-methylHA, GABA] are discussed in detail. AHA2 is a kind of interaction. A method was developed last year to improve the enzyme reaction system, and the chemical reaction system was used to construct the enzyme system. ALP enzyme 1 identifies the second antibody, NADP, NAD, and NADH. The third enzyme, NHR, NAD, FMN, FMNH2, is also present. FMNH_2 is the fourth enzyme in the production of FMN. The optimization of the above system is discussed, and the conditions for the optimization of the system are presented.