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集光性複合体と光合成反応中心の複合体の構造解析と回折能の改善方法の確立

光捕获配合物和光合反应中心配合物的结构分析及提高衍射能力的方法的建立

基本信息

批准号：
13033011
负责人：
佐藤孝雄
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

タンパク質結晶の回折能を改善するために、カチオンやアニオンの影響、つまり、各イオン種によるタンパク質への凝集力の差を利用した。放射光施設において2Å分解能で、好塩菌由来カタラーゼ-ペルオキシダーゼの構造解析に成功した。また、放射光のX線ビームの低発散角を活用し、強磁場下で結晶化させた卵白リゾチームの結晶性が向上することを調べた。さらに、仕込みタンパク質濃度を変えて結晶化したところ、各々過飽和度で結晶の回折能を制御できることも分かった。タンパク質結晶の最大分解能、回折強度のS/N比、モザイク測定といった回折物性研究に、放射光X線とファインスライシング法による測定法の組合せが特に有用であることも確かめた。実験モデルとして、好熱菌由来のV1-ATPaseとMg-ADP複合体の結晶学的研究にも着手した。紅色無硫黄細菌Blastochloris viridis由来の光合成反応中心-アンテナ複合体1(RC-LH1 complex)は、光エネルギーを電気化学ポテンシャルに変換する光合成の初期段階を担うRCと、RCと化学量論的に結合し、光エネルギーを吸収しRCに伝達する集光性複合体(LH1-complex)からなっている。本研究は、RC-LH1 complexの原子レベルでの構造を明らかにし、光エネルギーの移動の機構を解明するため、X線結晶構造解析に適した3次元結晶の作成を試みた。蒸気拡散法とバッチ法によって、RC-LH1複合体の結晶化実験を行った。PEGと塩を組み合わせた数条件において、板状の結晶を析出した。その中で、放射光施設においてX線回折実験を行った。最大分解能約15Åの回折パターンを得た。結晶は正方晶系(ラウエ群4/m)に属し、a=b=約160Å、c=約120Åと判定できた。電顕像などを考慮すると、非対称単位中には1分子のRC-LH1 complexが存在する。しかし、結晶構造解析を進めるには、引き続いて結晶化条件等の最適化、再検索を行っていく。

To improve the folding ability of the crystal, to make use of the difference in the cohesion of the crystal. The structure analysis of radioactive light application was successful in the analysis of decomposition energy and good bacteria origin. The low dispersion angle of X-ray radiation is used, and the crystallinity of white light is adjusted upward under strong magnetic field. In addition, the crystal concentration is changed, and the crystallization energy is controlled by the supersaturation. The maximum decomposition energy, S/N ratio of reflection intensity, and combination of measurement methods for reflection properties of crystalline materials are particularly useful. The crystallization of V1-ATPase Mg-ADP complex, which is the origin of thermophilic bacteria, has been studied. The RC-LH1 complex, a photosynthetic reaction center derived from the red sulfur-free bacterium Blastochloris viridis, is a light-collecting complex (LH1-complex) involved in the early stages of photosynthesis due to electrochemistry and conversion of photo-generated light. This research aims to clarify the structure of the atomic element of the RC-LH1 complex, explain the mechanism of movement of the optical element, and attempt to create three-dimensional crystals suitable for X-ray crystal structure analysis. Crystallization of RC-LH1 complex by evaporation method PEG is composed of several crystals. In the middle of the room, the radiation installation is in the middle of the X-ray reflection system. The maximum decomposition energy is about 15%. Crystallization is tetragonal (4/m), a=b= about 160 °, c= about 120 °. The existence of RC-LH1 complex in a single molecule is considered to be an important factor in electrical imaging. Optimization and re-evaluation of crystallization conditions, etc.