ユビキチンリガーゼとしてのパーキン蛋白の機能解析

Parkin 蛋白作为泛素连接酶的功能分析

• 批准号: 13035043
• 负责人: 服部 信孝
• 金额: $ 4.8万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13035043/
• 关键词: ユビキチンリガーゼ; パーキン蛋白; ユビキチン・プロテアソーム系; 若年性パーキンソン病; 基質; パエル受容体; 糖化修飾α-シヌクレイン; CDCrel-1; parkin; ubiquitin ligase; Pael receptor; ER stress; ubiquitin-proteasome系; 糖化修飾アルファシヌクレイン; Lewy小体

若年性パーキンソン病(AR-JP)の原因遺伝子パーキンはユビキチンリガーゼであることが我々の研究グループにより報告されている.Loss-of-function型変異効果が予想されるAR-JPではパーキン蛋白が分解する基質が分解されずに蓄積することで細胞死が誘導されることが予想される.従って,その基質同定が最重要課題である.そこでヒト脳cDNA libralyを用いYeast two hybrid screeningを行い14種のクローンを単離できた.そのうち既に基質候補として報告されているCDCrel-1を我々も単離できており,1)CDCrel-1がシナプス小胞に関する分子でありexocytosisに関与すること,2)パーキン蛋白の局在もシナプスにあること,3)神経細胞でシナプスが特によく発達していることを含めてパーキン蛋白のexocytosisの関与について検討した.方法としてはヒトGrowth hormone(GH)をtracerにパーキンcDNAとdouble transfectionを行い脱分極化及び非脱分極化で高感度ELISAにてヒトGHを測定した.CDCrel-1についてはoverexpression状態であってもexocytosisの抑制は観察されなかったが,パーキン蛋白のRING fingerドメインに変異を持つ変異パーキン蛋白ではドミナントネガティブ効果的にexocytosisを抑制した.これら結果からはパーキン蛋白はシナプスにあってexocytosisに関与していることが予想された.更に我々は理化学研究所脳科学センターの高橋良輔先生との共同研究でERストレスに関与するパエル受容体もその基質の一つであることを報告している.実際にパーキン遺伝子変異を確認できているAR-JP剖検脳を用いて免疫組織化学的検討を行った.用いた4例について検討したところexon 2に変異のある1症例にパエル受容体の蓄積を認めた.他の症例においてはその蓄積を認めなかった.少なくともパエル受容体の蓄積を1例に認めたことは基質候補して可能性の高い事を示す.この1例のみにパエル受容体の蓄積を認めたことの解釈としては,この症例が最も変異効果が強く殆どの分子が存在しないことにある.更に症例の蓄積を行いパエル受容体について検討する予定である.

If in sexual パ ー キ ン ソ ン disease (AR - JP) cause of の survived 伝 パ ー キ ン は ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ で あ る こ と が I 々 の research グ ル ー プ に よ り report さ れ て い る. Loss - of - the function - different working fruit が to think さ れ る AR - JP で は パ ー キ ン protein decomposition す が が る matrix decomposition さ れ ず に accumulation す Youdaoplaceholder0 とで とで cell death が induces される される とが とが to される. Youdaoplaceholder0,そ <s:1> matrix co-determination が the most important topic である そ でヒト脳 でヒト脳cDNA libralyを use 従って Yeast two hybrid Screening line を い 14 の ク ロ ー ン を 単 from で き た. そ の う ち both に matrix alternate と し て report さ れ て い る を CDCrel - 1 I 々 も 単 from で き て お り, 1) CDCrel - 1 が シ ナ プ ス vesicular に masato す る molecular で あ り exocytosis に masato and す る こ と, 2) パ ー キ ン protein の Bureau in も シ ナ プ ス に あ る こ と, 3) god 経 cells で シ ナ プ ス が, に よ く 発 da し て い る こ と を containing め て パ ー キ ン protein の exocytosis の masato and に つ い て beg し 検 た. Methods と し て は ヒ ト Growth hormone (GH) を tracer に パ ー キ ン cDNA と double Line transfection を い び the take off points off points polarization and polarization で Gao Gan degrees ELISA に て ヒ ト GH を determination し た. CDCrel - 1 に つ い て は overexpression state で あ っ て も exocytosis の inhibit は 観 examine さ れ な か っ た が, パ ー キ ン protein の RING Finger ド メ イ ン に - different を hold つ - different パ ー キ ン protein で は ド ミ ナ ン ト ネ ガ テ ィ ブ unseen fruited に exocytosis を inhibit し た. こ れ ら results か ら は パ ー キ ン protein は シ ナ プ ス に あ っ て exocytosis に masato and し て い る こ と が to think さ れ た. More に I 々 は riken institute 脳 science セ ン タ ー の Mr Takahashi good auxiliary と の joint research で ER ス ト レ ス に masato and す る パ エ ル by let body も そ の matrix の a つ で あ る こ と を report し て い る. Be interstate に パ ー キ ン heritage 伝 sub - different を confirm で き て い る AR - JP cutting 検 脳 を with い beg を line っ て immunohistochemical of 検 た. 4 cases were with い た に つ い て beg し 検 た と こ ろ exon 2 に - different の あ る 1 cases に パ エ ル by let body の accumulation を recognize め た. Cases he の に お い て は そ の accumulation を recognize め な か っ た. Less な く と も パ エ ル by let body の accumulation を 1 case に recognize め た こ と は matrix alternate し likely の て い matter を す. こ の 1 case の み に パ エ ル by let body の accumulation を recognize め た こ と の solution 釈 と し て は, こ の cases が most も - strong vision sharper fruit が く perilous ど が の molecules exist し な い こ と に Youdaoplaceholder0. For more に cases, the accumulation of を rows, パエ パエ, する acceptors, に, て検, て検 and する are determined by である.

项目成果

Wang M, et al.: "Expression of parkin and a parkin-interacting protein, ubiquitin-conjugating enzyme, UbcH7 in the developing rat brain"J Neurochem. 77. 1561-1568 (2001)

Wang M 等人：“Parkin 和 Parkin 相互作用蛋白、泛素结合酶、UbcH7 在发育中的大鼠大脑中的表达”J Neurochem。

Shimura S, et al.: "Ubiquitination of a novel form of α-synuclein by parkin from human brain : implications for Parkinson disease"Science. 293. 265-269 (2001)

Shimura S 等人：“人脑帕金蛋白对新型 α-突触核蛋白的泛素化：对帕金森病的影响”《科学》293. 265-269 (2001)

Kubo S, et al.: "Parkin is associated with cellular vesicles"J Neurochem. 78. 42-54 (2001)

Kubo S 等人：“Parkin 与细胞囊泡相关”J Neurochem。

Wang M, Hattori N, et al: "Expression of parkin and a parkin-interacting protein, ubiquitin-conjugating enzyme, UbcH7 in the developing rat brain"J Neurochem. 77. 1561-1567 (2001)

Wang M、Hattori N 等人：“Parkin 和 Parkin 相互作用蛋白、泛素结合酶、UbcH7 在发育中的大鼠大脑中的表达”J Neurochem。

Kubo S., Hattori N., et al.: "Parkin is associated with cellular vesicles"J Neurochem. 78. 42-54 (2001)

Kubo S.、Hattori N. 等人：“Parkin 与细胞囊泡相关”J Neurochem。