病原菌エリシター応答における新規カルシウム結合タンパク質の機能解析

一种新型钙结合蛋白在病原体激发子反应中的功能分析

• 批准号: 13039002
• 负责人: 竹澤 大輔
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-13039002/
• 关键词: カルシウム; エリシター; カルシウム結合タンパク質; PRタンパク質; 細胞内情報伝達

本年度はリガンドスクリーニングによるカルモジュリン結合タンパク質遺伝子の単離と解析を行った。標識したカルモジュリンをリガンドとして用い、cDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、カルモジュリンと結合するクローンが単離された。シロイヌナズナのCaMBD86と名付けた667アミノ酸からなるタンパク質をコードする遺伝子は、検索の結果、イネにおいて病原菌感染やSAR誘導剤BTHで特異的に誘導されてくる遺伝子との相同性を示した。シロイヌナズナの葉をBTHで処理すると、CaMBP86遺伝子の顕著な誘導がおこることが発現解析の結果明らかとなった。CaMBP86とカルモジュリンの相互作用について解析するため、大腸菌でCaMBP86の様々な欠失タンパク質をグルタチオンSトランスフェラーゼの融合タンパク質として発現させた。これらリコンビナントタンパク質をPVDF膜状に転写した後、ビオチン化カルモジュリンを用いてその結合能を評価したところ、アミノ酸490-554領域にカルモジュリンが結合することが明らかとなった。また、アミノ酸506-526領域の合成ペプチドIKVKLKNVSWAIASLSLKRPKAP (CMBPep)は、非変性条件下の電気泳動においてカルモジュリンの移動度をカルシウム依存的にシフトさせたことから、この領域がCaMBP86のカルモジュリン結合部位として同定された。植物の異なるカルモジュリンアイソフォームを用いた結合アッセイから、タバコにおいて過剰発現させるとSAR様の応答を引き起こすことが知られているSCaM4と相同性の高いアイソフォームMsCaMLがCMBPePに対して他より高い親和性を持っていることが明らかとなった。

This year, we will continue to conduct research and analysis on the quality of products. Identification of cDNA fragments, cDNA fragments, and combinations CaMBD86 and CaMBD667 were identified by the identification of pathogens, the detection of results, the identification of pathogens, and the identification of specific BTH inducers. The results of the analysis of CaMBP86 gene expression are as follows: CaMBP86 and E. coli interact with each other, and CaMBP86 and E. coli interact with each other. The binding energy of PVDF film is evaluated in the range of 490-554. In addition, the synthesis of KVKLKNVSWAIASLSLKRPKAP (CMBPep) in the domain of 506-526 was studied. Plant diversity is the result of a combination of high affinity and high affinity for SCaM4, which is the result of a combination of high affinity and high affinity for CMBPeP.

项目成果

Minaini: "Abscisic acid-induced freezing tolerance in the moss Physcomitrella patensis accompanied by increased expression of stress-related genes"Journal of Plant Physiology. (In press). (2003)

Minaini：“脱落酸诱导的小立碗藓的耐冻性伴随着胁迫相关基因表达的增加”植物生理学杂志。

Yamada: "Roles of the plasma membrane and the cell wall in the responses of plant cells to freezing"Planta. 215. 770-778 (2002)

山田：“质膜和细胞壁在植物细胞对冷冻的反应中的作用”Planta。

Ukaji et al.: "Cold acclimation-induced WAP27 localized in endoplasmic reticulum in cortical parenchyma cells of mulberry tree was homologous to group 3 late-embryogenesis aboundant proteins"Plant Physiology. 126. 1588-1597 (2001)

Ukaji 等人：“冷驯化诱导的 WAP27 定位于桑树皮质薄壁细胞的内质网中，与第 3 组胚胎发生晚期丰富的蛋白质同源”《植物生理学》。