新しいポリグルタミン病SCA17(TBP病)のモデル動物系の作成と分子病態解析

新型多聚谷氨酰胺病SCA17（TBP病）模型动物系统的建立及分子病理学分析

• 批准号: 14017019
• 负责人: 中村 浩一郎
• 金额: $ 4.42万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14017019/
• 关键词: ポリグルタミン病; モデル動物; SCA17; TATA結合蛋白; 痴呆; 小脳症状; トランスジェニック; 線虫

(1)トランスジェニック線虫の作成初期の実験で作成したトランスジェニック線虫は効率よく表現型を示さなかったので、実験法に改良を加えた。具体的には線虫の神経細胞特異的に発現するH20プロモータ下流に全長ヒトTBP遺伝子を繋いだコンストラクトPpD49.26(H20)-TBP_Q37、Q56、Q93、Q168、Q199をマーカー遺伝子dpy-20とともにdumpy mutantにトランスフェクションし、dpy表現型がrescueされる事を利用してトランスジェニック線虫を作成した。dpy-20のみ、各Q37、Q56、Q93、Q168、Q199とdpy-20をトランスフェクションしたtransgenic lineを各12ラインづつ得た。幼若線虫(L1〜L4)、成虫早期には各ライン間には行動異常・形態異常は認められなかった。しかしながらその後の解析により、低頻度(15%)ながらQ93〜Q199ラインにおいて、非常に強いlocomotion障害およびegg laying defectの表現型が観察される事を確認した。Nose touch testでは明らかに後退しない個体を認めた。現在Dye filling test(ASH neuron assay)、化学走性(chemotaxis assay)に関して検討を行っている。一方抗ヒトTBPN末モノクローナル抗体を用いた免疫組織化学的検討では、dpyラインでは線虫のauthentic TBPは染色されず、Q37ラインでは発現したヒトTBPにより神経細胞核が瀰漫性に染色された。これに対してQ199ラインでは神経細胞核の瀰漫性染色性は失われ、核内あるいは核近傍の細胞質内に凝集体を認めた。以上よりQ93〜特異的に核内あるいは細胞質内凝集体を有し、強い運動障害表現型を呈するポリグルタミン病モデルを作成したものと考えた。上記の結果を32th Annual meeting of Society for Neuroscience,2002(USA)にて発表した。(2)コンディショナルトランスジェニックマウスの作成Q199 transgenicマウスを現在5株樹立した。現在これらのマウスの胚細胞導入を確認中である。Q37 ransgenicマウスに関しては初回のinjectionにてtransgeneが確認できなかったので再度iinjectionを行ったところである。一方これらのtransgenicマウスと交配する予定のTet-Offマウスはジャクソン研究所より購入し、外注施設内にて現在継代繁殖中である。今後Q199/37 transgenicラインのSouthernblotを行い、全長のhuman TBPが確実にintegradeされている事およびtransgeneのコピー数の確認を行った後、Tet-Offマウスと交配し、表現型を確認する予定である。

(1)In the early stage of production, the expression pattern of the line worm was improved. The specific neurocyte-specific development of the parasite H20 is a full-length mutant TBP gene, which is produced by the parasite PpD49.26(H20)-TBP_Q37, Q56, Q93, Q168, Q199, and the parasite dpy-20. dpy-20, Q37, Q56, Q93, Q168, Q199, dpy-20, transgenic line, 12 lines. Young larvae (L1 ~ L4), early adults, abnormal behavior, abnormal morphology, abnormal recognition. After analysis, low frequency (15%), Q93 ~ Q199, very strong locomotion defect, egg layering defect, phenotype and observation were confirmed. Nose touch test Dye filling test(ASH neuron assay), chemotaxis assay One of the anti-TBP antibodies was used in immunohistochemical study. The results showed that TBP staining was positive and the expression of TBP was negative. In addition, there are also some changes in the nuclear and cytoplasmic aggregates in the nucleus. The above is a study of cytoplasmic aggregates. The above results were presented at the 32nd Annual Meeting of Society for Neuroscience,2002(USA). (2)Q199 transgenic plants are now standing on five trees. The embryo cells are now confirmed. Q37 ransgenic injection confirmation A side of the transgenic plant is selected for breeding. In the future, Southern blot of Q199/37 transgenic gene will be carried out, and the total length of human TBP will be confirmed. After the confirmation of the number of transgene, Tet-Off will be carried out, and phenotype will be confirmed.

项目成果

Hazeki N, et al.: "Ultrastructure of nuclear aggregates formed by expressing an expanded polyglutamine"Biochem Biophys Res Commun. 294(2). 429-440 (2002)

Hazeki N 等人：“通过表达扩展的聚谷氨酰胺形成的核聚集体的超微结构”Biochem Biophys Res Commun。