新しいポリグルタミン病SCA17(TBP病)のモデル動物系の作成と分子病態解析

新型多聚谷氨酰胺病SCA17（TBP病）模型动物系统的建立及分子病理学分析

• 批准号: 15016029
• 负责人: 中村 浩一郎
• 金额: $ 4.42万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016029/
• 关键词: ポルグルタミン病; トランスジェニックマウス; SCA17; TATA結合蛋白; モデル動物; 転写因子; 治療

SCA17トランスジェニックマウスの作成SCA17患者リンパ球を出発材料としてRT-PCRを行いTet-on/Tet-off gene expression systemであるpBI-EGFP vectorにヒト変異TBP cDNAの組み込みを行った。CAGがさらに伸長した変異TBPをPCRにて作成した(pBI-EGFP-TBP-Q37,56,98,168,199)。このpBI-EGFP-TBP_Q199 vectorのinsert部分を切り出し、microinjention法によりトランスジェニックマウスを作成した。産仔の尾DNAよりTBP配列およびEGFP配列を増幅するプライマーをそれぞれ用いてPCRにてtaransgeneを確認し、Q199トランスジェニックマウスを5株樹立した。Q199トランスジェニックマウス5株のF1すべてにおいて胚細胞導入が確認され、現在F3まで継代繁殖中である。F1〜F3において発達面、行動面、生存期間のいずれにおいても野生型との間に有意な差はなかった。一方コントロールとして用いる予定だったQ37トランスジェニクマウスは計3回microinjectionを行ったが、PCRおよびサザンブロットにてtransgeneの確認が出来なかった。今後、コントロールマウスはドキシサイクリン投与(+)群で代用する予定である。Q199トランスジェニックマウスと交配するTet-Offマウス:B6.Tg-TgN(Eno2tTA)5021NesはJackson研究所より購入し、継代繁殖を行った。これらQ199トランスジェニックマウスとB6.Tg-TgN(Eno2tTA)5021Nesとを交配し、本研究の目的である。ダブルトランスジェニックマウスが独立した4系統に得られた。現時点では明らかな胎生致死は確認されず、幼若なダブルトランスジェニックマウスにも明らかな表現型は確認されていない。今後、加齢段階で表現型の観察を継続すると心もに、マウス脳の病理学的検討を行う予定である。

SCA17 gene expression vector was constructed by RT-PCR and Tet-on/Tet-off gene expression system. CAG was amplified by PCR (pBI-EGFP-TBP-Q37,56,98,168,199). The insert part of the pBI-EGFP-TBP_Q199 vector is cut out, and the microinjection method is completed. TBP alignment and EGFP alignment were increased by PCR and 5 strains were established. Q199: Embryonic cell introduction of 5 strains of Q199 was confirmed, and F3 generation propagation is under way. F1 ~ F3: development surface, action surface, survival period, wild type, intentional difference A single microinjection is used to determine the presence of a gene. From now on, the number of entries in the list will be changed to the number of entries in the list. Q199 Tet-Off:B6.Tg-TgN(Eno2tTA)5021Nes Jackson Research Institute Tg-TgN(Eno2tTA)5021Nes. The system was designed to be independent. The present point is that the fetus is dead, and the phenotype is confirmed. In the future, the study of phenotype and pathology will be carried out.