核磁気共鳴装置を用いたβアミロイドペプチドのリン酸イオンによる凝集抑制機構の解明

利用核磁共振设备阐明磷酸盐离子对β-淀粉样肽聚集的抑制机制

• 批准号: 14017073
• 负责人: 植田 正
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14017073/
• 关键词: NMR; β-アミロイドペプチド; 凝集反応

申請者らは、βアミロイドペプチド1-40、1-42及び沈殿形成が速いβアミロイドペプチド25-35について、リン酸イオンと塩素イオン共存下でペプチドの凝集速度を比較した結果、リン酸イオン共存下では、塩素イオン共存下に比べ、凝集反応が極端に遅い傾向があることを既に報告している。そこで、本研究では、40残基からなるβアミロイドペプチドの凝集反応をリン酸イオンが抑制している理由を解明するため、リン酸イオンがβアミロイドペプチドと特異的な相互作用をしているか否かを調べ、リン酸イオンが凝集過程のどの段階に影響を及ぼすかを核磁気共鳴装置(NMR)を用いて明らかにすることを目的とした。まず、^<15>N均一ラベル化したアミロイドペプチドを発現するために安定同位体の取り込みの効率のよい大腸菌を選択した。リゾチーム-エンテロキナーゼ-βアミロイドペプチド1-40が発現するように遺伝子構築を行い、形質転換体を得て蛋白質発現を行った。リゾチームのシステイン残基に正電荷を持つアルキル化剤を導入することで、融合蛋白質の溶解度が向上し、変性蛋白質のままイオン交換樹脂により融合蛋白質を粗精製できた。エンテロキナーゼを用いて融合蛋白質を消化し、逆相HPLCにより目的のペプチドを精製後、^<15>Nラベル化したβアミロイドペプチド1-40を得ることができた。ペプチドの溶解性が悪いので、DMSO中で^1H-^<15>N HSQCを測定したところ、シグナルが分離良くわかれたスペクトルがえられ、目的のペプチドの調製が成功したことがわかった。水の含量を20%まで向上させた条件で、リン酸を添加したところ、特別なシグナルの変動はなかった。この結果から、アミロイドペプチドの特定な領域にリン酸イオンは結合せず、凝集過程に何らかの影響を与えていることが明らかとなった。

Applicants, β-phenotypes, antioxidants 1-40, 1-42, and Shen Dian were formed in the presence of β-phenylethylamine (25-35), acid (25-35), acid (β), acid (β), β (β), β (β) and β (β). Agglutinate the report from the end to the end of the report. In this study, 40 residues were detected in this study, and the results showed that there was no significant difference between the two groups in terms of their interactions. During the process of agglutination, both the nuclear magnetic resonance equipment (NMR) and the nuclear magnetic resonance equipment (NMR) were used to determine the purpose of the agglutination process. For example, ^ & lt;15>N are all selected for the first time because they are stable, and stable. In this case, you can see that the protein is not in the form of protein. The positive charge of the residue was introduced into the enzyme enzyme, the solubility of the fusion protein increased, the solubility of the fusion protein increased, and the fusion protein was purified. After the fusion protein was digested and reversed-phase HPLC was used, the fusion protein was digested and purified. After the purification of the fusion protein, the fusion protein was digested with the fusion protein, and the reverse phase of the fusion protein was digested with the reverse phase HPLC. After the essence, the ^ & lt;15>N protein was purified. In DMSO, the solubility was measured by the ^ 1H-^ & lt;15>N HSQC test, and the temperature was measured by the computer. The content of water is 20% higher than that of normal water, and the content of water is 20% higher than that of normal water. The results show that there is a significant difference between the combination of specific field-specific acid compounds, the process of agglutination, and the process of agglutination.

项目成果

Ueda T et al.: "Effect of sucrose on formation of theβ-amyloid fibrils and D-aspartic acids in Aβ1-42"Biol Pharm Bull.. 25・3. 375-378 (2002)

Ueda T等：“蔗糖对Aβ1-42中β-淀粉样原纤维和D-天冬氨酸形成的影响”Biol Pharm Bull.. 25・3 (2002)。

Monji A.et al.: "Amyloid-β-protein Aβ(25-35)-associated free radical generation is strongly influenced by the aggregational state of the peptides"Life Sciences. 70・7. 833-841 (2002)

Monji A. 等人：“淀粉样蛋白 Aβ(25-35) 相关的自由基生成受到肽聚集状态的强烈影响”生命科学 70·7 (2002)。

Klein-Seetharaman J et al.: "Long-range interactions within a nonnative protein"Science. 295・5560. 1719-1722 (2002)

Klein-Seetharaman J 等人：“非天然蛋白质内的长程相互作用”科学 295・5560 1719-1722 (2002)。