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ペプチドフラグメントを用いたリゾチーム構造形成初期過程の解析

利用肽片段分析溶菌酶结构形成的初始过程

基本信息

批准号：
06772136
负责人：
植田正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リゾチームの構造形成初期過程の解析をペプチドフラグメントを用いて行った。まず、未修飾リゾチームを酸性条件下でブロモシアンを用いて、Met12とMet105の末側に切れ目を入れたものを調整した。次に、これをV8プロテアーゼ消化により2ヵ所のGlu(7位と35位)のC末側ペプチド結合を切断した。この反応物をゲルクロマトグラフィー及び逆相HPLCを用いて、リゾチームのフラグメント36-105を得た。このフラグメントの蛍光極大は、未修飾リゾチームと同一の340nmであった。また、円偏光二色性(CD)スペクトルを測定すると222nm付近に負の分子楕円率の極小をもつパターンを示し、ヘリックス構造の形成が示された。これらの結果から、このフラグメント内のTrp62またはTrp63が未修飾リゾチームのそれらと同様に溶媒から遮蔽された環境に位置することがわかった。また、このフラグメントに唯一存在するヘリックス88-98は構造を持っていることがわかった。つぎに、このフラグメントをアセチル化して、このヘリックスのC末側に位置するLys96及びLys97の電荷を同時に消失されたフラグメントを調製した。このアセチル化フラグメントにおいて、蛍光極大は354nmまでシフトし、2つのTrp残基は溶媒に露出したことがわかった。一方、CDスペクトルより、ヘリックス構造は消失したことがわかった。ヘリックスC末側に位置する正電荷を消失させ、電荷一ヘリックスダイポール相互作用によるヘリックスの安定性を低下させることにより、Trp残基が溶媒に露出したことから、ヘリックス88-98とTrp62または、Trp63はフラグメント36-105において、相互作用していると結論した。このフラグメント領域は、リゾチームの構造形成初期段階で形成される領域であることから、フラグメントにおける相互作用は、構造形成初期段階で起こっていることが強く示唆された。

The analysis of the initial process of structural formation in the early stage of the formation of the structure is carried out in the middle of the process. In the presence of acid, Met12 and Met105 were modified to produce the final product. The second is to cut off the binding of Glu(position 7 and position 35) at the end of V8. The reaction mixture was obtained by HPLC and HPLC at 36-105. This is the same as the 340nm. The polarization dichroism (CD) spectrum was measured at 222nm and the formation of negative molecular polarization spectra was demonstrated. The result is that Trp62 and Trp63 in the solvent are not modified, and the solvent is shielded from the environment. 88-98 is the only one that exists. The charge of Lys96 and Lys97 at the end of C disappears simultaneously. The maximum wavelength of light is 354nm, and the Trp residue is exposed to the solvent. A party, CD, photo, photo, photo The positive charge disappears at the terminal position of C, the charge disappears at the terminal position of C, and the stability of Trp residue decreases at the terminal position of C. The Trp residue is exposed to the solvent at the terminal position of C. The Trp residue is exposed at the terminal position of C. The interaction between the domain and the early stage of the formation of the structure is strong.