胸腺外分化T細胞の生理的リガンドの探索と感染防御における病因論的役割の解析

寻找胸腺外分化T细胞的生理配体并分析其在预防感染中的病因作用

• 批准号: 14021059
• 负责人: 高橋 一郎
• 金额: $ 3.07万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021059/
• 关键词: 粘膜免疫; 胸腺外分化Tリンパ球; サイトカイン; 免疫制御; 微生物感染; ワクチン

研究目的:腸管粘膜には上皮細胞間リンパ球(IELs)とよばれるT細胞が上皮細胞6個に1個の割合で存在するが、その多くは胸腺外分化のT細胞である.これらIELsの発達分化を制御する生理的リガンドは不明のままである.最近ヒトγδIELsはストレスによって誘導されるMICAを認識すること、またγδT細胞に発現するNKG2DがMICAレセプターであることが明らかにされた.さらにRae-1とHSP60がNKG2Dリガンドとして機能している可能性が示された.こうした背景をふまえて分担研究者はIELsは、MICAのようなストレスによって誘導されるリガンドを発達分化に要求するものと考えた.本研究ではIELsの発達機構を明らかにする目的で腸管上皮でのNKG2Dリガンドの同定を試みる.さらにMICAを腸管に局所発現させた遺伝子改変マウスを作製し,胸腺外分化IELの発達分化機構について解明する.方法:(1)マウス腸管上皮細胞でのNKG2Dリガンドの同定を試みる目的でNKG2Dテトラマーを作製し、免疫組織化学的にリガンドの解析を試みた.(2)thymic leukemia antigenに由来するT3bプロモーターを使った腸管局所発現性MICAトランスジェニック(Tg)マウスを作製した.(3)作製したMICA TgマウスのIELsをFACS法で,クロノタイプについてはPCR-SSCP法で検討した.結果:(1)マウス小腸遠位部および大腸近位部粘膜の陰窩部上皮にNKG2Dテトラマーと反応するリガンドが存在することが明らかになった.またRae-1 β anti-sense RNAを用いてIn situ hybridization法にてその局在を検討したところ,小腸遠位と大腸近位の陰窩部粘膜にRae-1 β mRNAの発現がみられた.(2)今回新規に作製したMICA-Tgマウスでは小腸IELsにおいてCD4CD8αα^+αβT細胞の発達が亢進していた.このCD4^+CD8αα^+αβIELsはCD44, CD45RB, CD69などの活性化マーカーが陽性であった.またTCR発現様式とクロノタイプを解析すると、クローナルな増殖分化をうかがわせるTCRレパトア(すなわちVβ8.2-Jβ2.7)を示すことが明らかになった.考察:NKG2DテトラマーとRae-1 β anti-sense RNAを用いてIn situ hybridization法を駆使した実験の所見よりIELの発達を促すリガンドのひとつとしてRae-1βなどのNKG2Dリガンドの関与が示唆された.また、MICA-Tgマウスの解析からIELsはMICA特異的に誘導される環境ストレス適応性の胸腺外分化T細胞である可能性が示唆された.

Research purpose: Interepithelial cells (IELs) in the intestinal mucosa are divided into six epithelial cells and one epithelial cell. Extrathymic differentiation of T cells. The differentiation of IELs is controlled.トレスによって induces されるMICAを to get to know すること, またγδT Cell に発appears NKG2DがMICAレセプターであることが明らかにされた.さらにRae-1とHSP60がNKG2Dリガンドとしてfunctionしているpossibilityがshowされた.こうしたBackgroundをふまえてSharing researchers: IELs, MICA The purpose of this study is to guide the research on the requirements of differentiation. The purpose of IELs is to detect the intestinal epithelium and to test the intestinal epithelium.た伝子Adapted by マウスをproducedし, extrathymic differentiation IELの発达differentiation mechanism について Explain する. Methods: (1) マウス intestinal epithelial cells NKG2 Dリガンドの同定をtestみるpurposeでNKG2Dテトラマーをproductionし、immunohistochemistry analysisをtestみた.(2)thymic leukemia The origin of the antigen is the MI caused by the intestinal tract caused by T3b プロモーターをCAトランスジェニック (Tg) MASTER MICA. (3) MICA TgマウスのIELsをFACS method,クロノタイプについてはPCR-SSCP method was used. Results: (1) The distal part of the small intestineおよびLarge intestinal proximal mucosa and pudendal epithelium NKG2D テトラマーとanti Rae-1 β anti-sense RNAを用いてIn situ Hybridization method: にてその区在したところ, distal small intestine and proximal large intestine, pudendal mucosa Rae-1 β The expression of mRNA is the same. (2) The new regulations this time are the production of MICA-Tgマウスではsmall intestinal IELsにおいてCD 4CD8αα^+αβT cells are not hyperactive. They are CD4^+CD8αα^+αβIELs and CD44, CD45RB, CD69 active activation and positive TCR expression様式とクロノタイプをanalyticalすると、クローナルなproliferative differentiationをうかがわせるTCRレパトア(すなわちVβ8.2-Jβ2.7)を时すことが明らかになった. Investigation: NKG2D テトラマーとRae-1 β anti-sense RNAを用いてIn situ The method of hybridization is as follows:リガンドのひとつとしてRae-1βなどのNKG2D リガンドの Off and がshows instigationされた.また、MICA-TgマウスのanalyticsからIELsはMICA-specificにThe possibility of inducing extrathymic differentiated T cells in an environmentally friendly environment is instructive.

项目成果

Okuda, K., Takahashi, I., et al.: "Development of colitis in STAT6-deficient TCR alpha chain deficient mice : A potential role of STAT6-independent IL-4 signaling for the generation of Th2--------"American Journal of Pathology. 162. 263-271 (2003)

Okuda, K.、Takahashi, I. 等人：“STAT6 缺陷的 TCR α 链缺陷小鼠中结肠炎的发生：STAT6 独立的 IL-4 信号传导对于 Th2 生成的潜在作用 -----

Kunisawa, J., Takahashi, I., et al.: "Lack of antigen specific immune responses in anti-IL-7 receptor alpha chain antibody-treated Peyer's patch-null mice following intestinal immunization with"European Journal of Immunology. 23. 2347-2355 (2002)

Kunisawa, J., Takahashi, I.等人：“用抗IL-7受体α链抗体处理的派尔氏斑无效小鼠在用肠道免疫后缺乏抗原特异性免疫应答”《欧洲免疫学杂志》。

De Winter, H., Takahashi, I., Kronenberg, M., et al.: "Regulation of mucosal immune responses by recombinant interleukin 10 produced by intestinal epithelial cells in mice"Gastroenterology. 122. 1829-1841 (2002)

De Winter, H.、Takahashi, I.、Kronenberg, M. 等人：“小鼠肠上皮细胞产生的重组白介素 10 对粘膜免疫反应的调节”胃肠病学。

Takahashi, I., Matsuda, J., et al.: "Colitis-related public T cells are selected in the colonic lamina propria of IL-10-deficient mice"Clinical Immunology. 102. 237-248 (2002)

Takahashi, I.、Matsuda, J. 等人：“在 IL-10 缺陷小鼠的结肠固有层中选择结肠炎相关公共 T 细胞”临床免疫学。

粘膜ワクチン: "粘膜免疫学の最前線"医薬ジャーナル社. 102-115 (2002)

粘膜疫苗：“粘膜免疫学的最前沿” Iyaku Journal Inc. 102-115 (2002)