胸腺外分化T細胞の生理的リガンドの探索と感染防御における病因論的役割の解析

寻找胸腺外分化T细胞的生理配体并分析其在预防感染中的病因作用

• 批准号: 13226065
• 负责人: 高橋 一郎
• 金额: --
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13226065/
• 关键词: 粘膜免疫; 胸腺外分化; 粘膜系T細胞; NKG2D; NKG2D ligand; 感染免疫

腸管上皮細胞の側底面には腸管上皮細胞間リンパ球(IELs)とよばれるCD3T細胞が上皮細胞6個に1個の割合で存在するが、その多くは胸腺外分化のT細胞である.これらCD8αα+sIELsの発達分化を制御する生理的リガンド分子は今なお不明のままである.最近ヒトγδIELsはストレスによって誘導されるMICAを認識すること,またNK細胞とγδT細胞に発現するNKG2D分子がMICAレセプターであることが明らかにされた.さらにRae-1とH60がマウスNK細胞のNKG2Dリガンドとして機能している可能性が示された.本研究ではCD8αα+sIELsの胸腺外分化の分子機構を明らかにする目的で腸管上皮細胞でのNKG2Dリガンドを含む生理的リガンドの同定を試みる.また生理的リガンドの発現を制御する外的要因についても検討を加える。マウス小腸上皮細胞に発現するNKG2Dリガンドの探索:マウスNKG2Dの細胞外ドメインよりなるビオチン化NKG2Dテトラマーを作製し、フローサイトメトリー(FACS)法ならびに免疫組織化学的方法により,NKG2Dリガンドの探索を試みた.その結果,マウス小腸遠位部および大腸近位部粘膜絨毛の陰窩部上皮細胞層に限局してNKG2Dテトラマーと反応するリガンドが局在することが示された.またRac-1 βanti-sense RNAプローブを用いてIn situ hybridization法にてその局在を検討したところ,やはりマウス小腸遠位部ならびに大腸近位部粘膜絨毛の陰窩部上皮に限局してRae-1 β mRNAが発現していることが明らかになり,NKG2Dテトラマーを用いた場合とたいへん酷似した結果が得られた.以上の所見より胸腺外分化CD8αα+IELの機能分化を促す生理的なリガンドのひとつとしてRae-1β を代表とするストレス誘導性のNKG2Dリガンド分子が関与していることが強く示唆された.さらにこのRae-1βのヒトホモローグであるMICA分子をT3b promoterを用いて腸管局所に発現させた遺伝子導入(Tg)マウスを作製したところ,CD4/CD8αα両分子を発現した胸腺外分化IELのpositive selectionが著しく亢進することを見い出した.この所見からもRae-1 βをはじめとする環境ストレス誘導性MHC class Ib分子がIELの発達分化を制御することが支持された.

Epithelial cells of the intestinal canal の side underside に は bowel loops between epithelial cells リ ン パ ball (IELs) と よ ば れ る CD3T cells が epithelial cells 6 に 1 の cut or exist で す る が, そ の more く は thymus outer の T cells で あ る. こ れ ら CD8 alpha alpha + sIELs の 発 of differentiation を suppression す る physiological リ ガ ン ド molecular は today な お unknown の ま ま Youdaoplaceholder0. Recent ヒ ト gamma delta IELs は ス ト レ ス に よ っ て induced さ れ る MICA を know す る こ と, ま た NK cells と gamma delta T cells に 発 now す る NKG2D molecular が MICA レ セ プ タ ー で あ る こ と が Ming ら か に さ れ た. さ ら に Rae - 1 と H60 が マ ウ ス NK cells の NKG2D リ ガ ン ド と し し て function Youdaoplaceholder0 て る possibility が shows された. This study で は CD8 alpha alpha + sIELs の thymus differentiation の molecular agencies を Ming ら か に す る purpose で insufflate epithelial cells で の NKG2D リ ガ ン ド を containing む physiological リ ガ ン ド の with fixed を try み る. ま た physiological リ ガ ン ド の 発 now を suppression す る outside by に つ い て も を 検 please add え る. マ ウ ス intestinal epithelial cells に 発 now す る NKG2D リ ガ ン ド の exploration: マ ウ ス NKG2D の extracellular ド メ イ ン よ り な る ビ オ チ ン the NKG2D テ ト ラ マ ー を as し, フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー method (both FACS) な ら び に immunohistochemical method に よ り, NKG2D リ ガ ン ド の try to explore を み た. そ の As a result, マ ウ ス small intestine as a department お よ び e. proximal of mucosal villi の Yin fossa of epithelial cell layer に limit bureau し て NKG2D テ ト ラ マ ー と anti 応 す る リ ガ ン ド が bureau In す る こ と が shown さ れ た. ま た Rac - 1 beta anti - sense RNA プ ロ ー ブ を with い て In situ Hybridization method に て そ の bureau in を beg し 検 た と こ ろ, や は り マ ウ ス small intestine as a department な ら び に e. proximal department bureau of mucosal villi epithelial に の Yin fossa of the limit of し て Rae - 1 beta MRNA が 発 now し て い る こ と が Ming ら か に な り, NKG2D テ ト ラ マ ー を with い た occasions と た い へ ん resembles し た results ら が れ た. Seen above の よ り thymus outer differentiation CD8 alpha alpha + IEL の functional differentiation を promote す physiological な リ ガ ン ド の ひ と つ と し て Rae - 1 beta を representative と す る ス ト レ ス induced の NKG2D リ ガ ン ド molecular が masato and し て い る こ と が く and shown strong sucking さ れ た. さ ら に こ の Rae - 1 beta の ヒ ト ホ モ ロ ー グ で あ る MICA molecular を T3b Promoter を with い て insufflate bureau に 発 now さ せ た heritage 伝 son import (Tg) マ ウ ス を cropping し た と こ ろ, CD4 / CD8 alpha alpha struck molecular を 発 now し た thymus outer differentiation IEL の positive selection が the し く hyperthyroidism す る こ と を see い out し た. こ の seen か ら も Rae - 1 Beta を は じ め と す る environment ス ト レ ス induced MHC class Ib molecular が IEL の 発 of differentiation を suppression す る こ と が support さ れ た.

项目成果

Kim, J., Takahashi, I., et al.: "Influence of enterotoxin on the mucosal intranet : selective inhibition of extrathymic T cell development in the intestinal IELs by oral exposure to heat-labile toxin"Eur. J. Immunol.. 31巻. 2960-2969 (2001)

Kim，J.，Takahashi，I.，等人：“肠毒素对粘膜内网的影响：通过口服不耐热毒素选择性抑制肠 IEL 中的胸腺外 T 细胞发育”Eur.J.Immunol。 31. 2960-2969 (2001)

Kunisawa, J., Takahashi, I., et al.: "Sendai virus fusion protein-mediates simultaneous induction of MHC class I/II-dependent mucosal and systemic immune responses via NALT system"J. Immunol.. 167巻. 1406-1412 (2001)

Kunisawa, J.、Takahashi, I. 等人：“仙台病毒融合蛋白通过 NALT 系统介导同时诱导 MHC I/II 类依赖性粘膜和全身免疫反应”J.Immunol.. 167. 1406-1412 (2001)

Takahashi, I., Matsuda, J., et al.: "Colitis-related public T cells are selected in the colonic lamina propria of IL-10 deficient mice"Clinical Immunology. (印刷中). (2002)

Takahashi, I., Matsuda, J., et al.：“在 IL-10 缺陷小鼠的结肠固有层中选择结肠炎相关的公共 T 细胞”《临床免疫学》（2002 年出版）。

Kweon, M., Takahashi, I., et al.: "Development of antigen-induced enterocolitis in SCID mice reconstituted with spleen-derived memory type CD4CD45RB T cells"Gut. 50巻. 299-306 (2002)

Kweon，M.，Takahashi，I.，等人：“用脾源性记忆型 CD4CD45RB T 细胞重建 SCID 小鼠中抗原诱导的小肠结肠炎的发展”Gut. 50. 299-306 (2002)