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百日咳菌における病原因子の作用機構の解析

百日咳博德特氏菌致病因子作用机制分析

基本信息

批准号：
14021063
负责人：
岡清正
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021063/
关键词：
百日咳壊死毒細胞内小胞輸送

项目摘要

百日咳症実験モデル作製後の解析において組織および細胞での壊死毒の消長の検索を容易にするため、壊死毒分子の細胞への結合と細胞内移行に関わる機能ドメインを解析した。その結果、壊死毒のN末端側から54位Gluまでのペプチド断片(B断片)に細胞への結合ドメインが存在することがわかった。壊死毒はB断片中の44位アミノ酸残基のC末端側で動物細胞由来プロテアーゼのfurinによって切断された。細胞に対する壊死毒の作用はfurin処理により100倍程度強くなり、逆にfurin認識部位に点変異を導入したDNTは細胞に対する作用が完全に消失した。Furin処理後も壊死毒のN末端領域とC末端領域は非共有的に結合していた。Furin処理壊死毒は人工脂質膜と結合しなかったが、壊死毒の細胞への結合ドメインを除いたdelta Bは脂質膜と結合した。さらに、delta Bは本来壊死毒に感受性のない細胞にも作用した。細胞内小胞輸送の諸過程を阻害する試薬(バフィロマイシン、ブレフェルディン、など)の存在下でも、壊死毒の細胞に対する作用は影響を受けなかった。以上のことから、壊死毒は標的細胞上の受容体と結合した後、1)furinあるいはfurin様プロテアーゼによって切断を受け、2)受容体結合部位を除く断片(delta B)が自働的かつ非特異的に細胞膜と相互作用して活性断片を細胞質内に転位させると考えられた。delta B断片には、ヒト免疫不全ウイルスのTatタンパクに存在する細胞膜通過シグナルと相同性のある領域が存在する。しかし、この相同領域を欠失したDNTは細胞に対する毒素活性を消失しなかったので、DNTの細胞内移行にはこのTat相同配列は関与しないことがわかった。現在、Tat配列の上流に存在する膜貫通ドメインのDNTの細胞内侵入機構における役割を解析している。

Analysis of pertussis virus after pertussis was performed, tissue was used to analyze the growth and decline of dead virus, and it was easy to detect pertussis. Cell culture of dead virus molecules was combined with the combination of cytosol and cytosolic DNA of pertussis. The results showed that there were 54 Glu fragments (B fragments) in the N-terminal of the virus. The 44-position acid residue in the B fragment of Dead virus, the cell origin of the C-terminal enzyme in the detoxification B fragment, was closely related to the origin of the cell. The cell was cut off from the furin fragment. The effect of furin is 100 times stronger than that of furin, and the effect of DNT is completely disappeared. After Furin treatment, the N-terminal domain and C-terminal domain of the virus are not common to each other. Furin analysis showed that the artificial lipid membranes were combined with delta B lipid membranes and the cells of antiviral drugs were used to remove the lipid membranes. Delta B is supposed to be toxic, sensitive, sensitive, cellular and sensitive. In the process of intracellular delivery, it is necessary to prevent the existence of intranasal and detoxified cells. After the combination of the supra-cellular receptor of the above receptor and the virulent receptor, 1) the furin receptor was cut off by the furin receptor, and the receptor was cut off. 2) the receptor binding site removes the fragment (delta B), which is not specific to the cell membrane interaction, the active fragment, the intracellular membrane interaction, the cell membrane interaction, the active fragment, the intracellular membrane interaction, the cell membrane interaction, the active fragment, the intracellular membrane interaction, the cell membrane interaction, the active fragment, the intracellular membrane interaction. Delta B fragments, immune insufficiency, Tat immune response, cell membrane, homology, homogeneity, homogeneity, homology, homogeneity, homogeneity, homology, homogeneity, homology, homogeneity In the same field, the toxin activity disappears, the cytotoxin activity disappears, the intracellular migration of DNT, the same arrangement of Tat, the same arrangement of Tat, and the disappearance of toxin activity. At present, the upstream of the Tat configuration has the effect that the membrane is connected to the DNT and the intracellular intrusion mechanism is used to analyze the operating system.