C型解炎ウイルスコア蛋白質による細胞癌化機構の解析

C型病毒核心蛋白分析细胞癌变机制

• 批准号: 12770155
• 负责人: 岡 清正
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University (2001)Kobe University (2000)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770155/
• 关键词: C型肝炎ウイルス; コア蛋白質; p21 Wafl; Cipl; Sdil; PCNA; 分解促進; 細胞内局在; p21 Waf1; Cip1; Sdi1

我々は、C型肝炎ウイルスコア蛋白質がCDKインヒビターであるp21(Wafl)と結合すること、両者を細胞に共発現させるとp21の発現量が著しく抑制されることを見い出した。さらに、コア蛋白質によるp21の発現抑制には、p21の安定性に関わるサイクリン/CDK、PCNAは関与していないことを明らかにしてきた。本研究では、p21に対するコア蛋白質の作用機構について解析を行った。まず、両者の特異性について検討するため、コア蛋白質以外のC型肝炎ウイルス蛋白質とp21とを細胞に共発現させた。調べた限り(NS3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B)では、他のウイルス蛋白質が存在してもp21の発現量に変化は認められなかった。また逆に、p21以外の細胞蛋白質(2'-5'-オリゴアデニル酸合成酵素、RNA分解酵素L)の発現には、コア蛋白質は影響を与えなかった。よって、コア蛋白質の作用はp21に特異的であることが示唆された。次に、P21の発現抑制がどの段階で起こっているのかを調べるためノーザンブロッティングを行った。その結果、コア蛋白質の有無でp21mRNA量に差は認められなかった。これより。コア蛋白質は転写後のp21に作用することが明らかになった。また、このコア蛋白質の作用にはそのC末端領域(174から191アミノ酸)が必要であることを明らかにしてきた。そこで様々な大きさのC末端欠失コア蛋白質変異体を作製し、p21と共に細胞に発現させた。その結果、p21の発現に影響を与えない変異体は、野生型のコア蛋白質が細胞質に局在するのに対して、全て核内にその局在が認められた。この核内に局在する変異体(150アミノ酸)にC末端領域を結合させた変異体では細胞質にも局在するようになり、p21の発現抑制も弱いながら認められるようになった。以上より、コア蛋白質は細胞質内で転写後のp21の発現を抑制していることが明らかになった。

I 々 は, hepatitis C ウ イ ル ス コ ア protein が CDK イ ン ヒ ビ タ ー で あ る p21 (Wafl) と す る こ と, struck を cell に 発 now total さ せ る と p21 の 発 now quantity が the し く inhibit さ れ る こ と を see い out し た. さ ら に, コ ア protein に よ る p21 の 発 now inhibit に は, p21 の stability に masato わ る サ イ ク リ ン / CDK, PCNA は masato and し て い な い こ と を Ming ら か に し て き た. In this study, で に and p21に were used to analyze the <s:1> mechanism of action of するコア protein に った て て て and を lines った. ま ず, struck の specificity に つ い て beg す 検 る た め, コ ア protein outside の hepatitis C ウ イ ル ス protein と p21 と を cell に 発 now total さ せ た. Adjustable べ た り limited (NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B) で は, he の ウ イ ル ス protein が exist し て も p21 の 発 quantity に now - the は recognize め ら れ な か っ た. ま た inverse に, p21 の cell proteins (2 '- 5' - オ リ ゴ ア デ ニ ル acid synthesis enzyme, RNA decomposition enzyme L) の 発 now に は, コ ア protein は influence を and え な か っ た. Youdaoplaceholder0 and コア proteins <s:1> act on に p21に specific である された とが instigated された. に, P21 の 発 now inhibit が ど の Duan Jie で up こ っ て い る の か を adjustable べ る た め ノ ー ザ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ を line っ た. The そ <s:1> result and the に difference in the amount of でp21mRNA in the コア protein <e:1> determine められな った った った. Youdaoplaceholder0 れよ れよ. When the コア protein 転 転 is written, the function of <s:1> p21に is する する とが とが and ら ら になった. ま た, こ の コ ア の protein に は そ の C terminal area (174 か ら 191 ア ミ ノ acid) が necessary で あ る こ と を Ming ら か に し て き た. そ こ で others 々 な big き さ の C end owe lost コ ア protein - variant を as し, p21 と に total cell に 発 now さ せ た. そ の results, p21 の 発 に influence を and え な い - variant は, wild type の コ ア protein が cytoplasm に bureau in す る の に し seaborne て, whole て in nuclei に そ の bureau at が め ら れ た. こ の nuclear に bureau in す る - variants (150 ア ミ ノ acid) に C terminal fields を さ せ た - variant で は cytoplasm に も bureau in す る よ う に な り, p21 の 発 now inhibit も weak い な が ら recognize め ら れ る よ う に な っ た. Above よ り, コ ア protein は cytoplasm で planning after write の p21 の 発 now を inhibit し て い る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Wang,Fan: "Complex formation between hepatitis C virus core protein and p21 Waf1/Cip1/Sdi1."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273(2). 479-484 (2000)

王帆：“丙型肝炎病毒核心蛋白与p21 Waf1/Cip1/Sdi1之间的复合物形成”。Biochem.Biophys.Res.Commun. 273(2)。

Yoshida, I. et al.: "Inhibition of p21/Wafl/Cip1/Sdi1 expresson by hepatitis C virus core protein"Microbiol.Immunol.. 45(10). 689-697 (2001)

Yoshida, I. 等人：“丙型肝炎病毒核心蛋白对 p21/Wafl/Cip1/Sdi1 表达的抑制”Microbiol.Immunol.. 45(10)。

Wang, F. et al.: "Complex formation between hepatitis C virus core protein and p2lWaf1/Cip1/Sdi1"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273(2). 479-484 (2000)

Wang, F. 等人：“丙型肝炎病毒核心蛋白和 p2lWaf1/Cip1/Sdi1 之间的复合物形成”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 273(2)。