生体防御レクチンとCD14・Toll様受容体関与の自然免疫生体防御の分子機構

涉及防御凝集素和 CD14/Toll 样受体的先天免疫防御的分子机制

• 批准号: 14021105
• 负责人: 黒木 由夫
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14021105/
• 关键词: 生体防御レクチン; コレクチン; パターン認識受容体; CD14; Toll様受容体; ザイモザン; ペプチドグリカン; 自然免疫

本研究は、Toll様受容体(TLR)のリガンド認識機構を解明し、生体防御レクチンのコレクチンとCD14・Toll様受容体(TLR)との相互作用に基づく炎症制御の分子機構を解明し、その生理的意義を明らかにすることを目的として遂行された。以下に本年度の実績を要約する。1.TLR2細胞外ドメイン(Met1-Arg587)のC末端側にHis tagを付加したcDNA(sTLR2)を作成し、昆虫細胞-バキュロウィルス発現系を用いて組換え蛋白を発現、その培養上清からニッケルカラムにより、分子量約75kDaのsTLR2蛋白を精製した。N末端側アミノ酸は、Glu21でその配列はdeduced sequenceと一致した。2.ブドウ球菌由来ペブチドグリカン(PGN)と酵母由来ザイモザンとsTLR2をインキュベーションし、遠心沈降することによって沈渣画分にsTLR2が共沈したことからPGNおよびザイモザンとsTLR2との直接結合が示された。3.^<125>I標識sTLR2は、PGNとザイモザンに濃度依存性結合を示し、Klotz plotによる解析から、そのKdは48-67mMであることが示された。4.PGNあるいはザイモザン惹起NF-κB活性化およびマクロファージからのサイトカイン分泌を阻止しうる抗体は、PGNあるいはザイモザンとsTLR2との結合を有意に抑制することから、TLR2細胞外ドメインとリガンドとの直接結合がそのシグナリングとサイトカイン分泌を惹起するものと考えられた。5.肺コレクチンのSP-AはsTRL2に結合し、SP-AリガンドではないPGNあるいはザイモザンとsTLR2との直接結合を抑制することによって、マクロファージでのPGN/ザイモザン惹起NF-κB活性化とTNF-α分泌を有意に抑制していることが明らかにされた。6.SP-Aは、肺胞マクロファージによる非定型抗酸菌、ブドウ球菌と肺炎球菌の取り込みを有意に増加させ、病原菌体のクリアランスに寄与していることが示された。

This study aims to clarify the understanding mechanism of Toll Receptor (TLR), the biological defense mechanism of Toll Receptor (TLR) and CD14, the molecular mechanism of inflammation control, and the physiological significance of TLR. The following is a summary of the results for the year. 1. The cDNA(sTLR2) of TLR2 extracellular domain (Met1-Arg587) was prepared by adding His tag to the C-terminal region. The protein was produced by using the recombinant protein in insect cell-derived system. The protein was purified from the supernatant of the culture medium. N-terminal side acid, Glu21, and the alignment of the derived sequence are consistent. 2. PGN and sTLR2 are directly associated with each other in the presence of PGN and sTLR2. 3.^ <125>I marker sTLR2, PGN, Kd, Kd. 4. PGN may cause NF-κB activation and secretion to be inhibited by antibodies. PGN may cause NF-κB activation and secretion to be inhibited by antibodies. PGN may cause NF-κ B activation and secretion to be inhibited by TLR2 extracellular binding. 5. SP-A binds to sTRL2, SP-A binds to PGN, PGN binds to sTRL2, PGN binds to sTRL 6.SP-A is an intentionally increased number of non-acid-fast bacteria, bacteria and pneumococci, and the pathogen is an indicator of the presence of these bacteria.

项目成果

Greene KE: "Serum surfactant protein A and D as biomarkers in idiopathic pulmonary fibrosis"Eur Repir J. 19. 439-446 (2002)

Greene KE：“血清表面活性蛋白 A 和 D 作为特发性肺纤维化的生物标志物”Eur Repir J. 19. 439-446 (2002)

黒木由夫: "気道における自然免疫生体防御-生体防御レクチンとエンドトキシン受容体"気管支学. 24. 595-602 (2002)

Yoshio Kuroki：“呼吸道的先天免疫防御 - 防御凝集素和内毒素受体”《支气管学》24. 595-602 (2002)。

Murakami S: "Surfactant protein A inhibits peptidoglycan-induced TNF-α secretion in 937 cells and alveolar macrophages by direct interaction with Toll-like receptor 2"J Biol Chem. 277. 6830-6837 (2002)

Murakami S：“表面活性蛋白 A 通过与 Toll 样受体 2 直接相互作用抑制 937 细胞和肺泡巨噬细胞中肽聚糖诱导的 TNF-α 分泌”J Biol Chem. 277. 6830-6837 (2002)

黒木由夫: "肺コレクチンによる自然免疫生体防御-CD14・TLRとの相互作用を会する細胞応答制御"医学のあゆみ. (印刷中).

Yoshio Kuroki：“肺集合素的先天免疫防御 - 通过与 CD14 和 TLR 相互作用控制细胞反应”医学史（正在出版）。

Sato M: "Direct binding of Toll-like receptor 2 to zymosan, and zymosan-induced NF-κB activation and TNF-α secretion are downregulated by lung collectin surfactant protein A"J Immunol. (In press).

Sato M：“Toll 样受体 2 与酵母聚糖的直接结合，以及酵母聚糖诱导的 NF-κB 激活和 TNF-α 分泌受到肺集合素表面活性蛋白 A 的下调”J Nutrition（正在出版）。