生体防御レクチンとCD14・Toll様受容体関与の自然免疫生体防御の分子機構

涉及防御凝集素和 CD14/Toll 样受体的先天免疫防御的分子机制

• 批准号: 15019094
• 负责人: 黒木 由夫
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019094/
• 关键词: 生体防御レクチン; コレクチン; 自然免疫; CD14; Toll様受容体; 肺サーファクタント蛋白質; マクロファージ; ザイモサン

本研究においてはパターン認識分子である生体防御レクチンとCD14/TLR関与の自然免疫機構を解明するために、TLRのリガンド認識機構、TLRとCD14およびコレクチンとの相互作用、コレクチンによるマクロファージ活性化の機構を明らかにすることを目的として遂行された。以下に本年度の実績を要約する。1.酵母カビの細胞壁成分のザイモサンはTLR2導入HEK293細胞でのNF-κB活性化とRAW264.7細胞からのTNF-α分泌を濃度依存性に促進した。Met^1-Arg^<587>領域からなる可溶型TLR2蛋白はザイモサンと共沈し、^<125>I標識sTLR2はザイモサンに濃度依存性、飽和性の結合を示した。SP-Aは、TLR2発現HEK293細胞でのザイモサン誘導NF-κB活性化を抑制し、肺胞マクロファージからのザイモサン刺激TNF-α分泌を低下させた。SP-AとTLR2細胞外ドメンとの結合によってTLR2-ザイモサン相互作用が減弱してTLR2介在シグナル伝達とTNF-α分泌の抑制が惹起されると考えられた。2.TLR2の欠損変異体と点突然変異体の解析により、マイコプラズマリポ蛋白刺激NF-κB活性化には、TLR2のSer^<40>-Ile^<64>、および、Leu^<107>、Leu^<112>とLeu^<115>が必須であることが示された^<7)>。3.PGN刺激によるTLR2介在シグナル伝達はCD14の共発現により増強するが、TLR2細胞外ドメインとCD14との結合を明らかにした。その結合はCD14のアミノ酸残基57-64領域を認識する単クローン抗体によって阻止され、欠損変異体CD14^<Δ57-64>はsTLR2と結合できなかった。TLR2とCD14^<Δ57-64>との共発現によってwtCD14でみられるPGN惹起NF-κB活性化の増強効果は認められなかった。4.肺コレクチンは肺炎球菌と非定型抗酸菌に濃度依存性に結合するとともに、FITC-標識細菌の肺胞マクロファージへの取り込みを促進した。細菌貧食促進効果はコレクチンと細菌との結合に非依存性で、細胞との相互作用が重要であった。さらに、コレクチンは、クロファージ上でのスカベンジャー受容体Aとマンノース受容体の発現を増加させることによって細菌の貧食を促進していると考えられた。

This study aims at understanding the molecular relationship between biological defense and CD14/TLR and natural immune mechanisms, understanding the mechanism of TLR and CD14, and understanding the interaction between TLR and CD14, and activating mechanisms. The following is a summary of the results for the year. 1. NF-κB activation and TNF-α secretion in HEK293 and RAW264.7 cells were enhanced in a concentration-dependent manner. Soluble TLR2 protein is expressed in the Met1-Arg <587>domain in a <125>concentration-dependent and saturable manner. SP-A and TLR2 expressed in HEK293 cells inhibited NF-κB activation and stimulated TNF-α secretion. The binding of SP-A and TLR2 extracellular molecules to TLR2-TLR2 interaction was attenuated, and TLR2 mediated the inhibition of TNF-α secretion. 2. TLR2 is deficient in protein expression, and the protein stimulates NF-κB activation. TLR2 is Ser^<40>-Ile^<64>, Leu^<107>, Leu <112>^<115>. 3. The expression of CD14 in TLR2 cells stimulated by PGN was significantly increased. The binding of CD14 to residues 57-64 is recognized by antibodies that block and damage CD14^&lt;Δ57-64&gt; and sTLR2. TLR2 and CD14^&lt;Δ57-64&gt; co-occurrence of PGN induced NF-κB activation 4. The concentration dependence of pneumococci and non-type acid-fast bacteria was promoted by FITC-labeled bacteria. Bacteriological starvation promotes the growth of bacteria, and the interaction between bacteria and cells is important. The development of the receptor A and the development of the receptor B are promoted by the bacteria.

项目成果

Okusawa, T.: "Relationship between structures and biological activities of Mycoplasmal diacylated lipopeptides and their recognition by Toll-like receptors 2 and 6."Infect.Immun.. 72. 1657-1665 (2004)

Okusawa, T.：“支原体二酰化脂肽的结构和生物活性及其被 Toll 样受体 2 和 6 识别的关系。”Infect.Immun.. 72. 1657-1665 (2004)

黒木由夫: "肺コレクチンによる自然免疫生体防御 -CD14・TLR2の相互作用を介する細胞応答制御-"医学のあゆみ. 205. 11-16 (2003)

Yoshio Kuroki：“肺集合素的先天免疫防御 - CD14/TLR2 相互作用介导的细胞反应控制”医学史 205. 11-16 (2003)。

佐野仁美: "肺サーファクタント蛋白質による自然免疫の分子機構"分子呼吸器病. 7. 220-224 (2003)

佐野瞳：“肺表面活性蛋白介导的先天免疫的分子机制”《分子呼吸疾病》7. 220-224 (2003)。

黒木由夫: "肺サーファクタント蛋白質-SP-AとSP-D"臨床化学. 32. 216-226 (2003)

Yoshio Kuroki：“肺表面活性蛋白-SP-A 和 SP-D”临床化学 32. 216-226 (2003)。

Sato, M.: "Direct binding of Toll-like receptor 2 to zymosan, and zymosan-induced NF-kB activation and TNF-a secretion are down-regulated by lung collectin surfactant protein A."J.Immunol.. 171. 417-425 (2003)

Sato, M.：“Toll 样受体 2 与酵母聚糖直接结合，酵母聚糖诱导的 NF-kB 激活和 TNF-a 分泌被肺集合素表面活性蛋白 A 下调。”J.Immunol.. 171. 417