アレイCGH法によるヒト造血器腫瘍染色体7番長腕欠失領域からの癌抑制遺伝子の同定

阵列CGH法鉴定人造血肿瘤7号染色体长臂缺失区抑癌基因

• 批准号: 14026034
• 负责人: 麻生 博也
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026034/
• 关键词: アレイCGH; 白血病; 染色体欠失

(目的)ヒト造血器悪性腫瘍の微小染色体欠失領域を検出する新しいアレイCGH法を開発し、白血病の約10%にみられ、二次性白血病や骨髄異形成症候群に高頻度に認められる7番染色体長腕の欠失領域に存在する癌抑制遺伝子を単離する。(方法)従来のBAC DNAをプローブとして使用するアレイCGH法とは異なり、本研究では50-100kbごとに任意に選んだゲノム配列よりPCR法により増幅した5kb長のDNAをプローブとしてスライド上に貼り付ける。これにより、従来のアレイCGH法では検出できなかった100kb単位の微小欠失を検出可能する。この方法を用いて、明らかに7番染色体に欠失をもつ症例のみならず、染色体上欠失を見出せない白血病サンプルからの微小な欠失領域の特定を試みる。(結果)染色体7qに30、7pに6、Xに9、20qに7、3pに2個の合計54個の5kb長のPCR産物を作成し、プローブとしてスライド上に貼り付け、-7もしくは7q-をもつ白血病細胞株で、欠失を蛍光強度の半減として検出できるかを検討した結果、欠失領域において0.6-0.7レベルの蛍光比を得ることに成功し、至適な条件の設定を完了した。現在、プローブを7q22-31領域内に250個作成し、最終的に実験に用いるアレイを作成中である。また昨年われわれは、非常にまれな7q-を持つ白血病細胞株(FUKU-1)を樹立し、研究材料として用いている。さらに-7/7q-をもつ白血病細胞がTNFα, GM-CSF,IL-4により樹状細胞に分化する能力が、他の核型の白血病細胞株に比し、非常に高いことを見出している。今後、実際の臨床サンプルを用いた実験を新しいアレイを用いてさらに推進して、微小共通欠失領域の特定と、そこからの責任遺伝子の同定を行う。

Objective: To identify new microchromosome deletion domains in hematopoietic tumors, develop novel CGH methods, identify highly frequent 7-chromosome deletion domains in leukemia, secondary leukemia, and osteogenesis syndrome, and identify cancer suppressor genes. (Method) The BAC DNA from the past was amplified by PCR and the CGH method was used. In this study, the DNA from 50-100kb was amplified by PCR and the DNA from 5kb was amplified by PCR. The CGH method can detect small errors in 100kb units. This method is used to detect the presence of chromosome 7 deficiency in leukemia patients, and to detect the presence of chromosome 7 deficiency in leukemia patients. (Results) A total of 54 PCR products of 5kb in length were produced for chromosome 7q, 30, 7p, 6, X, 9, 20q, 7, 3p. The PCR products were successfully obtained from leukemia cell lines, and the light intensity of the missing region was 0.6-0.7. To the end of the condition setting. Now, 250 pieces are made in the field of q22-31, and the final pieces are made in the middle of the field. The leukemia cell line (FUKU-1) was established and used in the study. The ability of leukemia cells to differentiate into dendritic cells with TNFα, GM-CSF,IL-4 and other karyotypes is very high compared to leukemia cell lines. In the future, the actual clinical application of new technologies will be promoted, and the specific and common responsibilities of small common areas will be determined.

项目成果

Asou, H.: "Resveratrol, a Natural Product Derived from Grapes, is a New Inducer of Differentiation in Human Myeloid Leukemias"Int J of Hematology. 75. 528-533 (2002)

Asou, H.：“白藜芦醇是一种从葡萄中提取的天然产物，是人类髓系白血病分化的新诱导剂”Int J of Hematology。

Asou, H.: "Establishment of the Acute Myeloid Leukemia Cell Line Kasumi-6 From a Patient with a Dominant-Negative Mutation in the DNA-binding Region of the C/EBPα gene"Genes Chromosome and Cancer. 36. 167-174 (2003)

Asou, H.：“从 C/EBPα 基因 DNA 结合区有显性负突变的患者建立急性髓性白血病细胞系 Kasumi-6”，基因染色体和癌症 36。167-174（ 2003）