悪性黒色腫に対するcalreticulin/TRP-2DNAワクチンの開発

抗恶性黑色素瘤的钙网蛋白/TRP-2 DNA疫苗的开发

• 批准号: 14026043
• 负责人: 岡本 哲郎
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Sapporo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14026043/
• 关键词: Calreticulin; TRP-2; DNAワクチン; 悪性黒色腫; 腫瘍拒絶抗原; 抗原性; 抗体

DNAワクチンは、ペプチドを用いる方法と異なり、すべてのアミノ酸配列が細胞内で発現しプロセッシングされるため、患者HLAに規定されずに抗原ペプチドとなりうる配列を免疫担当細胞に提示させ得る利点を有している。その抗原性を高める方法として、抗原ペプチドとMHC分子の結合の場である粗面小胞体へのシャペロンとしてcalreticulin (CRT)に注目した。そこで研究代表者らがこれまで研究を行ってきた、悪性黒色腫抗原のひとつであるTRP-2とCRTの融合蛋白を発現し得るプラスミドを作製し、in vivoにおける免疫原性に与える影響についてTRP-2 DNAとCRT/TRP-2 DNAワクチンで比較検討しすることを目的として、初年度においては、まずCRT DNAワクチンとTRP-2 DNAワクチンを作製し、C57BL/6マウスに免疫した。その結果、非ワクチン投与マウスおよびpcDNA3コントロールワクチンで免疫したマウス血清中には、CRT、TRP-2のいずれに対する抗体も誘導されていなかった。また、pcDNA CRTワクチンで免疫したマウス血清中に、抗CRT抗体を測定することはできなかった。しかし、pcDNA3 TRP-2ワクチンを投与されたマウス血清中には、1600倍から3200倍希釈陽性のIgG抗体が誘導されていた。次に、pcDNA3 TRP-2ワクチンによって誘導される免疫応答が、腫瘍拒絶効果を発揮するかについて検討した。TRP-2 DNAワクチンで免疫した後、マウス悪性黒色腫細胞の皮下腫瘍を作製したところ、その腫瘍増殖はコントロールDNAワクチンで免疫した群に比べ、有意に抑制されていた。すなわち、TRP-2が腫瘍拒絶抗原としてDNAワクチンでも有望な抗原であることが確認された。現在CRT/TRP-2融合蛋白を発現できるDNAワクチンを作製中で、より強い抗腫瘍活性を誘導できることを明らかにしていく予定である。

The method of DNA sequencing is different from that of DNA sequencing, and the sequence of DNA sequencing is different from that of DNA sequencing. The method of antigenicity is to select the antigen from the MHC molecule binding field. Representative of the study conducted the study on the development of TRP-2 and CRT fusion protein in vivo, immunogenicity and impact of TRP-2 DNA and CRT/TRP-2 DNA in vitro, and the development of CRT fusion protein in vivo. C57BL/6 is immune. The results showed that the anti-CRT and TRP-2 antibodies were induced in the serum of non-CRT and pcDNA3. The expression of anti-CRT antibody in serum was detected by PCR. In addition, pcDNA3 TRP-2 was injected into the serum and 1600-fold and 3200-fold positive IgG antibodies were induced. In addition, pcDNA3 TRP-2 can induce immune response and tumor rejection. TRP-2 DNA is immune to, and is intentionally inhibited by, subcutaneous tumors in black cells. The TRP-2 antigen is rejected by the tumor and is expected to be confirmed by DNA. Now CRT/TRP-2 fusion protein has been developed, and its anti-tumor activity has been induced.

项目成果

Sasaki H, Okamoto T, Niitsu Y, et al.: "Induction of heat-shock protein 47 synthesis by TGF-β and IL-1β via enhancement of the heat-shock element binding activity of heat-shock transcription factor 1"Journal of Immunology. 168. 5178-5183 (2002)

Sasaki H、Okamoto T、Niitsu Y 等人：“通过增强热休克转录因子 1 的热休克元件结合活性，通过 TGF-β 和 IL-1β 诱导热休克蛋白 47 合成”杂志免疫学。168。5178-5183（2002）