試験管内ES細胞分化システムを用いたABL関連ガン遺伝子の生物学的機能の解析

利用体外 ES 细胞分化系统分析 ABL 相关癌基因的生物学功能

• 批准号: 14028069
• 负责人: 江良 択実
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14028069/
• 关键词: p185BCR-ABL遺伝子; TEL-ABL遺伝子; ABL関連白血病; ES細胞; テトラサイクリン発現誘導; p210BCR-ABL遺伝子; in vitro分化システム; OP9ストロマ細胞

ABL関連白血病遺伝子であるTEL-ABLならびにp185BCR-ABL遺伝子をテトラサイクリン反応性プロモーターの下流につないだコンストラクトを作成した。このコンストラクトでは、遺伝子の下流に、internal ribosomal entrysite (IRES)でつないだEnhanced GFPの遺伝子が挿入済みなので、GFP遺伝子の発現を調べることで、容易に導入細胞を識別できる。そこでこれらの遺伝子のコンストラクトを、申請者がすでに樹立した親株ES細胞に導入し、G418で選別し、TEL-ABL, p185BCR-ABLの発現が厳格にコントロールされるES細胞を樹立した。次に、2つ遺伝子の発現による影響がES細胞に与える影響をテトラサイクリンの存在下、非存在下で検討した。その結果、p185BCR-ABLではES細胞のコロニー形態がroundingし、著しい変化を示すのに対して、TEL-ABLを発現させた細胞では、ほとんど変化が見られなかった。次に、血液細胞に対する効果を解析するために、ES細胞をin vitroでOP9ストロマ細胞と共培養することで、強制的に血液細胞へと分化させた後、これらの遺伝子の発現を誘導した。p185BCR-ABLを発現させるとp210BCR-ABLと同様に未熟血液細胞の増加が見られたが、TEL-ABLではその効果は非常に弱いものであった。細胞表面マーカーの解析では未熟血液細胞のマーカーであるc-kit陽性、細胞系列マーカー(TER119, CD11b, B220)陰性細胞の割合の増加が、ともに遺伝子を発現した血液細胞で観察された。以上の結果はTEL-ABL, p185BCR-ABLが同一細胞に与える効果が、異なることを示唆している。今後は、細胞分化に与える影響を血液コロニー法を用いて解析する予定である。また、免疫不全マウスへの移植についてもシステム確立のための基礎実験を開始している。

ABL masato even traces of leukemia 伝 son で あ る TEL - ABL な ら び に p185BCR - traces of ABL 伝 son を テ ト ラ サ イ ク リ ン anti 応 sex プ ロ モ ー タ ー の obscene に つ な い だ コ ン ス ト ラ ク ト を made し た. こ の コ ン ス ト ラ ク ト で は, heritage 伝 の obscene に, internal ribosomal entrysite (IRES) で つ な い だ Enhanced GFP の posthumous son 伝 が scions into 済 み な の で, GFP but 伝 の 発 now を adjustable べ る こ と で, easy に import cell を recognize で き る. そ こ で こ れ ら の posthumous son 伝 の コ ン ス ト ラ ク ト を, applicants が す で に set し た parent strain に import し ES cells, G418 で し, TEL - ABL, p185BCR - ABL の 発 now が 厳 lattice に コ ン ト ロ ー ル さ れ る を ES cells establish し た. に, 2 つ posthumous son 伝 の 発 now に よ る influence に が ES cells and え る influence を テ ト ラ サ イ ク リ ン の the presence and the presence of で beg し 検 た. そ の results, p185BCR - ABL で は ES cells の コ ロ ニ ー form が rounding し, the し い variations change を shown す の に し seaborne て, TEL - ABL を 発 now さ せ た cells で は, ほ と ん ど variations change が see ら れ な か っ た. に, blood cells に す seaborne る unseen fruit を parsing す る た め を に, ES cells in vitro で OP9 ス ト ロ と マ cells co-culture す る こ と で, forced に blood cells へ と differentiation さ せ た, こ れ ら の heritage 伝 son の 発 now を induced し た. P185BCR - ABL を 発 now さ せ る と p210BCR - ABL と with others に unripe blood cells の raised plus が see ら れ た が, TEL - ABL で は そ の unseen fruit は very weak に い も の で あ っ た. Cell surface マ ー カ ー の parsing で は unripe blood cells の マ ー カ ー で あ る c - kit, cell series マ ー カ ー (TER119 CD11b, B220) negative cell の cut の raised plus が, と も に posthumous son 伝 を 発 now し た blood cells で 観 examine さ れ た. の above results は TEL - ABL, p185BCR - ABL に が the same cells and え る unseen fruit が, different な る こ と を in stopping し て い る. In the future, である, cell differentiation に and える affect を blood コロニ を method を use て て to analyze する and determine である. ま た, incomplete immune マ ウ ス へ の transplantation に つ い て も シ ス テ ム establish の た め の basis be 験 を began し て い る.

项目成果

Era, T., Wong, S., Witte, O.N.: "Analysis of Bcr-Abl function using an in vitro embryonic stem cell differentiation system."Methods and Protocols for Embryonic Stem Cells and Lineage Specific Differentiation.. 185. 83-95 (2002)

Era, T.、Wong, S.、Witte, O.N.：“使用体外胚胎干细胞分化系统分析 Bcr-Abl 功能。”胚胎干细胞和谱系特异性分化的方法和方案.. 185. 83-95

Kitajima K., Masuhara M., Era T., Enver T., Nakano T.: "GATA-2 and GATA-2/ER display opposing activities in the development and differentiation of blood progenitors."EMBO J. 21. 3060-3069 (2002)

Kitajima K.、Masuhara M.、Era T.、Enver T.、Nakano T.：“GATA-2 和 GATA-2/ER 在血液祖细胞的发育和分化中表现出相反的活性。”EMBO J. 21. 3060-

Takumi Era: "Bcr-Abl is a "molecular switch" for the decision for growth and differentiation in hematopoietic stern cells"Int J Hematol.. 76. 35-43 (2002)

Takumi Era：“Bcr-Abl 是决定造血干细胞生长和分化的“分子开关””Int J Hematol.. 76. 35-43 (2002)