トランスジェニックマウスを用いた白血病発症の分子機構の解析

利用转基因小鼠分析白血病发生的分子机制

• 批准号: 08770849
• 负责人: 江良 択実
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770849/
• 关键词: プロモーター; ES細胞; 分化誘導; OP9; 急性白血病

染色体異常t(8;21),inv(16)をともなう急性白血病では、この染色体異常のためにそれぞれAML1/MTG8,PEBP2/MYH11といった新しい融合遺伝子が生成される。まず、これらの融合遺伝子をトランスジェニックマウスの血液細胞で特異的に発現させるためにはどのプロモーターを用いるのが良いかを比較検討した。プロモーターの下流にレポーター遺伝子としてlacZ遺伝子をつないだコンストラクトを作成しES細胞に導入し解析した。ES細胞はマクロファージの増殖因子であるM-CSFを欠損しているストロマ細胞OP9と共培養することで比較的簡単に血液細胞まで分化させることが可能である。すべての細胞で発現することが知られているEF-1のプロモーターを用いた場合、導入したES細胞クローンの1/4でES細胞全体に強く発現するクローンが得られた。さらにこれらのES細胞をOP9上で血液細胞まで分化させてその発現を単球、赤芽球、巨核球系で解析した。すべての細胞系列でlacZ遺伝子の発現が見られたが、ES細胞と違いその発現は血液細胞の50%ほどにとどまり、すべての血液細胞で発現しているクローンは得られなかった。次に巨核球系細胞で特異的に発現するGpIIbのプロモーターを用いて同様の実験を行った。ES細胞での発現が見られないにもかかわらず、分化誘導で得られた巨核球に特異的に発現するクローンを数多く得ることができた。これらの結果よりトランスジェニックマウスに用いるプロモーターは慎重に選択する必要があることが判明した。現在どのプロモーターがよりよく血液細胞で遺伝子を発現させるのに適しているかさらに研究をすすめている。またすでに解析したEF-1プロモーターについてはその下流にAML1/MTG8融合遺伝子をつないだコンストラクトを作成してマウス受精卵に導入する研究も同時にすすめている。

Chromosomal abnormalities t(8;21),inv(16), and acute leukemia chromosome abnormalities include AML1/MTG8, PEBP2/MYH11, and new fusion genes are generated. A comparative study was conducted on the specific occurrence of fusion proteins in blood cells. The analysis of ES cells was carried out in the downstream of the cell line. ES cells are deficient in M-CSF, which is the growth factor of ES cells. When EF-1 cells are introduced into ES cells, 1/4 of ES cells are strongly expressed. In addition, the differentiation of ES cells on OP9 was analyzed by the development of cells, erythrocytes and megakaryocytes. 50% of the blood cells in the ES cell line were found to be defective. The expression of GpIIb in megakaryocytic cells is similar to that in normal cells. ES cells can be induced to differentiate into megakaryomegal-specific cells. The result of this is that we need to be careful. Now, we're going to do some research on the development of blood cells. The analysis of EF-1 and AML1/MTG8 fusion gene was carried out simultaneously with the introduction of fertilized eggs.

项目成果

T.Era,T.Takahashi,K.Sakai K.Kawamura,T.Nakano: "Thrombopoietin enhances proliferation and differentiation of murine yolk sac progenitors" Blood. (in press). (1997)

T.Era，T.Takahashi，K.Sakai K.Kawamura，T.Nakano：“血小板生成素增强小鼠卵黄囊祖细胞的增殖和分化”血液。