新組み換え技術を用いたがん治療用麻疹ウイルスベクターの開発

利用新重组技术开发用于癌症治疗的麻疹病毒载体

• 批准号: 14030015
• 负责人: 小原 恭子
• 金额: $ 3.9万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030015/
• 关键词: リバースジェネティクス法; C型肝炎ウイルス; 肝がん; AFP; モノクローナル抗体

本研究では、本来肝臓に親和性のない麻疹ウイルス(MV)をリバースジェネティクス法を用いて改良し、肝がん細胞にターゲティングする治療ベクター(rMV)の作製を目的としている。肝がん特異的なrMVを作出するため、まず肝がんに多く発現する胎児性抗原であるα-fetoprotein (AFP)を認識するモノクロナール抗体(mAb)の可変領域(VH,VL)をつなげた遺伝子(scFv)のクローニング・作製を試みた。抗AFP hybridoma細胞(OM3.1-1)からVH,VL領域をRT-PCR法によりクローニングし、MVのレセプター結合蛋白質である膜蛋白遺伝子HのC末端につなげた。これを、MVフルゲノムDNAにさらに組み込んでrMV-scFVを作製した。現在、一定法に従い組み換えウイルスのレスキューを行っている。また、新たな腫瘍抗原を探索する目的で、全長C型肝炎ウイルス(HCV)-cDNAを発現・継代して腫瘍原性が亢進した細胞をマウスに免疫し、mAbを作製した。ELISAで1000クローン以上をスクリーニングし、HCV発現継代細胞の表面で発現変化する抗原を認識するクローンを何種か得た。このうちクローン2-152、2-433、2-243はそれぞれ約50、30、70kDa.の分子を認識した。50kDa.分子はHCV陽性の全ての患者(5/5)でがん部での発現が上昇していた。これに対し、B型肝炎ウイルス(HBV)陽性、非B非C型肝がん患者ではそれぞれ60%(3/5)、40%(2/5)で上昇していた。また70、30kDa.分子は各患者群の20〜60%でがん部での発現上昇が見られた。

This study aims to improve the efficacy of the original liver affinity therapy (MV) by modifying the MV therapy and the rMV therapy. The liver specific rMV is produced in the presence of fetal antigen α-fetoprotein (AFP), and the variable domain (VH,VL) of antibody (mAb) and scFv are identified. Anti-AFP hybridoma cells (OM3.1-1) contain VH,VL domains, and binding proteins of MV and MV by RT-PCR. This is the first time that we've had a chance to do this. Now, there must be a way to change it. To explore new tumor antigens, full-length hepatitis C virus (HCV)-cDNA was developed, and the tumor cells were immunized with mAb. More than 1000 copies of the virus were identified on the surface of HCV developing cells. 2-152, 2-433 and 2-243 are about 50, 30 and 70 kDa. 50kDa. molecule was found in all HCV positive patients (5/5). The incidence of hepatitis B virus (HBV) positive, non-B and non-C type liver disease increased by 60%(3/5) and 40%(2/5) respectively. The 70 and 30 kDa. molecules were found to increase in 20 ~ 60% of all patient groups.

项目成果

Kashiwagi, T., et al.: "Kinetic analysis of C-terminally truncated RNA-dependent RNA polymerase of Hepatitis C virus"B.B.R.C.. 290. 1188-1194 (2002)

Kashiwagi，T.等人：“丙型肝炎病毒C末端截短的RNA依赖性RNA聚合酶的动力学分析”B.B.R.C..290.1188-1194(2002)

Hirama, K. et al.: "Lymphocyte Activity Specific for Hemagglutinin (H) Protein of Canine Distemper Virus in Dogs."J.V.M.S. 65. 109-112 (2003)

Hirama, K. 等人：“犬瘟热病毒血凝素 (H) 蛋白的淋巴细胞活性。”J.V.M.S.

小原道法, 町田圭吾, 小原恭子: "C型肝炎ウイルスによる細胞死抑制と病原性発現機序 特集●慢性肝炎と肝癌"Mlecular Medicine. 6 (2002)

Michiho Ohara、Keigo Machida、Kyoko Ohara：“丙型肝炎病毒对细胞死亡和致病性表达机制的抑制”专题：慢性肝炎和肝癌”Mlecular Medicine 6（2002）。

小原 恭子: "代謝および脂肪分化制御における4E-BP1の新たな役割"実験医学. 4 (2002)

Kyoko Ohara：“4E-BP1 在调节代谢和脂肪分化中的新作用”实验医学 4 (2002)。

Yoneda, M., et al.: "Rinderpest virus H protein : role in determining host range in rabbits"J. Gen. Virol.. 83(Pt6). 1457-1463 (2002)

Yoneda, M., et al.：“牛瘟病毒 H 蛋白：在确定兔子宿主范围中的作用”J.