C型肝炎ウイルスの自然免疫応答と肝がん発生の機構に関する研究

申請者の本年度の研究は主にHCVのマウス感染モデルの作製において進展した。各種遺伝子改変マウスから肝実質細胞株を調整し、HCV感受性の高い株を樹立した。HCV感染はマウス肝実質細胞では起きないこと、ヒトCD81,ヒトOccludinなどを発現させると感染はするが、複製はしないことが報告されていた。他のウイルスではインターフェロンAレセプター(IFNAR)-/-のマウスにヒトウイルスが感染することが判明していたので、インターフェロン(IFN)関連遺伝子のKO肝細胞株をSV40不死化技術を使って作製した。感染効率はIPS-1-/- 肝細胞株で顕著であった。IPS-1は細胞質のdsRNAセンサーのアダプターであり、これを欠損するだけでIFNAR-/-肝細胞株以上の効率でHCV感染が誘導しうることは重要な発見であった(論文投稿中)。さらにこのIPS-1-/-肝細胞株にヒトCD81を発現させると、J6JFH1株の感染・複製を許容することが証明された。しかし、上清にウイルス粒子は残念ながら回収できなかった。従ってHCV life cycleを保証するには到らなかったが、HCVのマウス感染系がin vitroで組めるようになった。現在、1.さらに感染効率を上げること、2.これらをマウスに移植して「HCVに罹る実験動物」を作製すること、3.Bリンパ球が感染キャリアーとなるかを査定中である。マウスのHCV感染査定系を確立できれば、ヒト(とチンパンジー)にしか感染系がないHCVのライフサイクルの研究や阻害剤の開発を可能にする。申請者らは感染時の自然免疫応答をin vitroで解析することを次の企画として推進中である。将来的にマウス肝細胞を感染細胞株に置き換えればHCVの持続感染と慢性化を再現でき、Steatosisからがん化に到る過程の解析にも貢献しうる。

申請者の本年度の研究は主にHCVのマウス感染モデルの作製において進展した。各種遺伝子改変マウスから肝実質細胞株を調整し、HCV感受性の高い株を樹立した。HCV感染はマウス肝実質細胞では起きないこと、ヒトCD81,ヒトOccludinなどを発現させると感染はするが、複製はしないことが報告されていた。他のウイルスではインターフェロンAレセプター(IFNAR)-/-のマウスにヒトウイルスが感染することが判明していたので、インターフェロン(IFN)関連遺伝子のKO肝細胞株をSV40不死化技術を使って作製した。感染効率はIPS-1-/- 肝細胞株で顕著であった。IPS-1は細胞質のdsRNAセンサーのアダプターであり、これを欠損するだけでIFNAR-/-肝細胞株以上の効率でHCV感染が誘導しうることは重要な発見であった(論文投稿中)。さらにこのIPS-1-/-肝細胞株にヒトCD81を発現させると、J6JFH1株の感染・複製を許容することが証明された。しかし、上清にウイルス粒子は残念ながら回収できなかった。従ってHCV life cycleを保証するには到らなかったが、HCVのマウス感染系がin vitroで組めるようになった。現在、1.さらに感染効率を上げること、2.これらをマウスに移植して「HCVに罹る実験動物」を作製すること、3.Bリンパ球が感染キャリアーとなるかを査定中である。マウスのHCV感染査定系を確立できれば、ヒト(とチンパンジー)にしか感染系がないHCVのライフサイクルの研究や阻害剤の開発を可能にする。申請者らは感染時の自然免疫応答をin vitroで解析することを次の企画として推進中である。将来的にマウス肝細胞を感染細胞株に置き換えればHCVの持続感染と慢性化を再現でき、Steatosisからがん化に到る過程の解析にも貢献しうる。