生体内におけるADAMTS-4の機能:トランスジェニックマウスを用いた研究

ADAMTS-4 的体内功能：使用转基因小鼠进行的研究

• 批准号: 14071201
• 负责人: 渡辺 秀人
• 金额: $ 10.24万
• 依托单位: Aichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14071201/
• 关键词: 細胞外マトリックス; 軟骨; ADAMTS-4; 代謝; 蛋白質分解酵素; トランスジェニックマウス

本研究の目的は、「ADAM-TS4(アグリカナーゼ1)を時間的・空間的制御下に発現できるトランスジェニックマウスを用いて、軟骨を含め種々の組織における同酵素の機能、および他のタンパク質分解酵素との協調的な分解機構を明らかにすること」である。トランスジェニックマウスの作製にはテトラサイクリン誘導発現系を用いることとし、トランスジェニックマウス用のベクターを作製した。軟骨分化を示すATDC5細胞を用いて作製したベクターの機能を調べたところ、テトラサイクリンの除去により発現するADAMTS-4の量が少ないこと、同酵素が細胞培養液中では殆ど分解されてしまっていることがわかった。同ベクターを用いてトランスジェニックマウスを作製しても軟骨組織内において期待できる活性が得られない可能性が高いため、急遽ベクターに改良を加えることとした。まず、Tet-off系の代わりにCre-IoxPシステムによって遺伝子を発現させる方法を考案した。これは、Iox-Pによって挟まれた終始コドンを持つエクソンをプロモーターと遺伝子の開始コドンを持つエクソンとの間のイントロンに挿入しておき、Cre酵素によって挿入エクソンをはずすことにより遺伝子を発現させるシステムである。また、ADAMTS-4全長の発現に加え、培養液中で分解されることなく安定な酵素活性が検出されるADAMTS-4/Sp変異型を発現させることを考案した。この改良型ベクターを作製し、現在、細胞培養系を用いて同ベクターの機能を確認中である。上記のトランスジェニシクマウス計画に加え、ADAMTS-4抵抗性アグリカンを産生するノックインマウスも作製中であり、これらマウスの解析によってさらに同酵素の生体内における機能の詳細が明らかになるものと期待される。

The purpose of this study is to "explore the development and application of ADAM-TS4 (ADAM-TS1) under temporal and spatial control, and the coordinated decomposition mechanism of cartilage including seed tissue, enzyme function and other enzymes." For the purpose of controlling the activity of the enzyme, the enzyme is used to induce the reaction of the enzyme. Cartilaginous differentiation was demonstrated in ATDC5 cells by using the same enzyme to regulate the function of ADAMTS-4 in cell culture medium. In the same way, it is possible to improve the activity of cartilage tissue by increasing the activity of cartilage tissue. A study of the method for the development of a new generation of Tet-off systems This is the first time that a virus has been detected in a cell. The first time that a virus has been detected in a cell, a virus has been detected in a cell. The results showed that ADAMTS-4/Sp isoforms could be detected by enzyme activity in culture medium. This improved version of the system is currently in use in cell culture systems and is currently in the process of confirming its function. In addition, ADAMTS-4 is resistant to enzyme degradation and is expected to be used in the analysis of enzymes in vivo.