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“細胞内遺伝子検出システム“を用いる薬剤高速スクリーニング系の構築

利用“细胞内基因检测系统”构建高速药物筛选系统

基本信息

批准号：
16011232
负责人：
山東信介
金额：
$ 3.52万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16011232/
关键词：
ゲノム遺伝子アロステリック DNAzyme 診断 FRET 蛍光細胞膜

项目摘要

"細胞膜内における遺伝子検出・診断"を可能にするプローブとして、申請者は標的核酸をアロステリックエフェクターとする自己切断核酸配列(TASC)を提案してきた。コンセプトとの実証は細胞外系における定量的な自己切断反応速度解析から確認することができたが、実際の細胞膜内での使用に向け、標的核酸非存在下における自発的自己切断速度の抑制が大きな障害となっていた。そこで、標的核酸存在下における自己切断速度を軽減するため、TASCシステム中にヘアピンロック構造を形成する核酸配列を導入することを計画した。実際にLocked-TASCシステムを合成し、その活性を測定したところ、およそ、20倍程度のON/OFF効率の上昇が見受けられた。本プローブを用いて大腸菌リボソーマルRNAの細胞膜内検出にも成功している。本年度後半においては、自己切断能を持つ核酸配列の最適化、すなわち、konの飛躍的向上を目指すために、試験管内進化システム(SELEX)を行った。SELEXは2通りの核酸に対して行った。1つは従来法に従った、DNAを主構造としてもつTASCシステムのセレクションであり、もうひとつは、リボレギュレーターシステムへの応用を見越した完全RNA配列からなるTASCシステムである。どちらも現在セレクションを実施中であり、本セレクションによってより高度に進化した配列が得られるものと期待している。特に、後半のRNAを主構造に持つTASCシステムのセレクションは、蛍光消光分子を用いない細胞膜内遺伝子検出への応用が期待でき、当初の計画に大きく寄与するものと考えている。

It is possible to cut off the nucleic acid sequence (TASC) of the nucleic acid in the cell membrane. The quantitative analysis of the speed of self-cutting in the extracellular system confirmed that the nucleic acid in the cell membrane was used in the non-existence of the nucleic acid in the cell membrane. In the presence of nucleic acids, the speed of self-cutting, the speed of self-cutting, the formation of nucleic acid alignment, the formation of nucleic acid alignment, and the formation of nucleic acid alignment, the nucleic acid alignment was introduced into the computer program. The international Locked-TASC is very sensitive to the synthesis, the activity test, the temperature response, and the temperature response of the 20-fold ON/OFF. In this experiment, the bacteria were successfully released from the cell membrane of RNA. In the second half of the year, I cut off the ability to optimize the nucleic acid alignment, improve the kon performance, and improve the SELEX performance in the tube. SELEX 2 is responsible for the detection of nucleic acid. 1. The main structure of the DNA system is to make sure that the TASC is correct, and that the main structure of the system is to make sure that the TASC is fully assigned to each other. There is a high level of improvement in the current system, and we are looking forward to the development of the system. In the last half of the RNA system, the main structure of the TASC device, the light extinction molecule, the light extinc