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"細胞内遺伝子検出システム"を用いる薬剤高速スクリーニング系の構築

利用“细胞内基因检测系统”构建高速药物筛选系统

基本信息

批准号：
15011228
负责人：
山東信介
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

薬剤高速スクリーニング系の構築に向け、酵素・試薬等を必要とせず細胞内で自発的に機能する細胞内遺伝子診断プローブの開発、最適化と細胞導入法の検討を重点的に行った。本法の実現は生きた細胞内における遺伝子発現を高精度で識別し、高速で検出する究極の活性分子スクリーニングを可能にする。本プローブ第1世代として、標的核酸上でのホスホロチオエート-ダブシル官能基間の有機化学反応を用いた大腸菌細胞内遺伝子検出・高速スクリーニングに取り組み、これに成功した。(本研究は最先端の研究成果として日経新聞に掲載された)併せて、細胞内ゲノム検出に加え、PCRに相当するシグナル増幅をも細胞内で行う細胞内遺伝子診断プローブを提案、第2世代プローブ(AutoTaqmanプローブ)として開発に成功している。AutoTaqmanプローブは標的核酸をアロステリックエフェクターとする自発的自己切断配列を含むオリゴヌクレオチドプローブである。このAutoTaqmanプローブを用いた細胞外遺伝子診断実験においては、FRETペアーを同一鎖内に導入することにより、自己切断によって誘起される蛍光発光により迅速に遺伝子診断を行えるようになった。また、その精度は非常に高く、1塩基の違いを区別することが可能であった。第2世代AutoTaqmanプローブは、その遺伝子検出・診断において、酵素、試薬等を一切必要とせず、細胞内遺伝子診断の要求を満たす。また、0.1%SDSを用いることにより、効率よく生大腸菌内に本プローブを導入できることが確認された。本プローブは、生きた細胞内で遺伝子を「認識」、「増幅」,さらに「診断する」インテリジェントケミカルプローブであり、生細胞内遺伝子検出・診断実現、並びに、本基本技術を利用した薬剤スクリーニング系構築の可能性は非常に高い。

The development and optimization of intracellular gene diagnosis platform for the construction of high-speed gene transfer system, enzyme assay, etc. are essential for the development and optimization of intracellular gene transfer method. This method enables high precision identification and high speed detection of the most active molecules in the cell. The present invention relates to an organic chemical reaction between the target nucleic acid and the target nucleic acid. (This study is the first research results published in the Japanese News) and successful development of intracellular gene detection, PCR amplification, intracellular gene diagnosis, and the second generation of AutoTaqman. AutoTaqman's target nucleic acid sequence includes: This AutoTaqman is used for extracellular gene diagnosis. It is used for cellular gene diagnosis. It is used for cellular gene diagnosis. The accuracy is very high, and the accuracy is very high. The second generation AutoTaqman provides all the necessary information for gene detection and diagnosis, including enzymes and reagents. In addition, it was confirmed that 0.1% SDS was used to efficiently introduce this protein into coliform bacteria. The present invention provides a method for detecting and diagnosing intracellular genes, and the possibility of constructing a system utilizing the present basic technology is very high.