中枢神経系におけるDNA修復機構障害と神経変性機構の解明

阐明中枢神经系统DNA修复机制障碍和神经变性机制

• 批准号: 16015242
• 负责人: 五十嵐 修一
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16015242/
• 关键词: aprataxin; APTX; SSBR; DNA repair; EAOH; ataxia; exonuclease

APTXとXRCC1の相互作用部位の決定に関して、APTXのN末端から段階的に欠失する5種類のコンストラクト、およびXRCC1のC末から段階的に欠失させた5種類のコンストラクトを作成し、免疫沈降法およびYeast two hybrid systemを用いて詳細な相互作用部位を決定した。APTXのN末端のForkhead-associated domain(FHA domain)の一部であるN末端側20アミノ酸とXRCC1のC末端に位置するBRCTドメインの一部を含んだ領域(アミノ酸は配列492-574)が相互作用することが判明した。FHA domainは、リン酸基認識ペプチドとして知られており、XRCC1の結合部位におけるリン酸化の有無とAPTXの結合の関係、および中枢神経系内のXRCC1リン酸化シグナル伝達経路解明の手がかりとなった。一本鎖DNA損傷修復過程におけるAPTXの生理機能に関して、45merのオリゴおよびそれに相補的な20mer,24merのオリゴを用いて、1ヌクレオチドギャップの2本鎖DNAを作成し、再構成実験を行った。組換えAPTXタンパク質が、in vitroでの再構成実験系において、3' exonuclease活性を有することを検証した。以上の結果より、APTXの生理機能として、1)DNA polymerase beta・DNA ligase IIIと共役して塩基除去修復におけるproof readingを行う.2)一本鎖DNA修復過程でunconventional DNA 3' -endを処理する。3)DNA 3' -トポイソメラーゼI複合体の解離修復のalternative pathwayとして作用する。などの可能性が考えられる。APTXの有する3' exonucleaseのAPTXの中枢神経系での一本鎖PNA損傷修復過程における役割の解明に貢献した。

APTX と XRCC1 の interaction part の decided に masato し て, APTX の N terminal か ら Duan Jie に owe lost す る 5 kinds の コ ン ス ト ラ ク ト, お よ び XRCC1 の C late か ら Duan Jie に owe lost さ せ た 5 kinds の コ ン ス ト ラ ク ト を made し, immune sink お よ び Yeast two hybrid The systemを uses を て to determine the detailed な interaction sites を. APTX has a Forkhead-associated domain(FHA) at the N-terminal Domain) の a で あ る N terminal side 20 ア ミ ノ acid と XRCC1 の C terminal position に す る BRCT ド メ イ ン の contains a を ん だ areas (ア ミ ノ acid は go up 492-574) が interaction す る こ と が.at し た. FHA domain は, リ ン acid base know ペ プ チ ド と し て know ら れ て お り, XRCC1 の combining site に お け る リ ン acidification の presence of と APTX の combining の masato, お よ び central god 経 is の XRCC1 リ ン acidification シ グ ナ ル 伝 amounted to interpret 経 road の hand が か り と な っ た. A lock DNA damage repair process に お け る APTX の physiology に masato し て, 45 killing の オ リ ゴ お よ び そ れ に phase of な 20 killing, killing 24 の オ リ ゴ を with い て, 1 ヌ ク レ オ チ ド ギ ャ ッ プ の 2 this lock を DNA into し, then constitute be 験 を line っ た. Group in え APTX タ ン パ ク が, the in vitro で の form again be 験 department に お い て, 3 'を exonuclease activity have す る こ と を 検 card し た. の above results よ り, APTX の physiology と し て, 1) DNA polymerase beta, DNA ligase III と し total service て salt base to remove repair に お け る proof reading を う. 2) a lock DNA repair process で unconventional DNA 3' -endを handle する. 3) DNA 3 '- ト ポ イ ソ メ ラ ー ゼ I repair complex の dissociation の the alternative pathway と し て role す る. Youdaoplaceholder0 えられる な が likelihood が test えられる. APTX has する3' exonuclease. APTX has central nervous system で. One lock PNA injury repair process における. Corned-cut. Explanation に. Contribution た.

项目成果

The FHA domain of aprataxin interacts with the C-terminal region of XRCC1

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.10.162
• 发表时间: 2004-12-24
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Date, H;Igarashi, S;Onodera, O
• 通讯作者: Onodera, O