中枢神経系におけるDNA修復機構障害と神経変性機構の解明-アプラタキシン(APTX)の生理機能の検討-

阐明中枢神经系统DNA修复机制障碍和神经变性机制 - 检查aprataxin (APTX)的生理功能 -

• 批准号: 15016045
• 负责人: 五十嵐 修一
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15016045/
• 关键词: aprataxin; DNA repair; APTX; EAOH; SCA; ataxia; SSBR; XRCC 1

L-APTXとXRCC1の相互作用部位の決定Long form APTXのN末端から段階的にの欠失する5種類のコンストラクト、およびXRCC1のC末から段階的に欠失させた5種類のコンストラクトを作成し、Yeast two hybrid systemを用いて相互作用部位の決定を試みた。Long form APTXのN末端20アミノ酸とXRCC1のC末端に位置するBRCTドメインが相互作用することが判明した。同様な結果は、培養細胞に上記コンストラクトを強発現させた系で、共免疫沈降法によっても相互作用部位が確認された。一本鎖DNA損傷修復過程におけるAPTXの役割の検討L-APTXのN末端がpolynucleotidekinase-3'-phosphatase(PNKP)にホモロジーを有すること、またL-APTXのN末端にXRCC1が結合することより、L-APTXの機能は一本鎖DNA損傷修復の中でも塩基除去修復の過程に関るであろう仮説の基、以下の実験を行った。塩基除去修復過程に必要なpolynucleotidekinase-3'-phosphatase(PNKP)、DNA polymerase beta・DNA ligase IIIの組換え蛋白質をバクテリア発現ベクターまたはバキュロウイルスベクターを用いた系で作成した。45merのオリゴおよびそれに相補的な20mer,2merのオリゴにより、1ヌクレオチドギャップの2本鎖DNAを作成し、ABI 3100 sequencerを用いて再構成実験を解析し、1本鎖DNAの修復が行われることを我々の系において確認した。次にこの系にXRCC1を加えると既報通り、1本鎖DNA修復の効率が促進された。同じ系にXRCC1の代わりにL-APTXを加えるとXRCC1同様に修復の効率が促進された。また、各ステップに分けて解析した結果、L-APTXにPNKP同様のpolynucleotidekinase-3'-phosphatase活性を有することが明らかとなった。

The determination of the interaction site between L-APTX and XRCC1 was carried out in the N-terminal stage of the Long form APTX and the C-terminal stage of XRCC1. The determination of the interaction site was carried out in the Yeast two hybrid system. Long form APTX N-terminal 20 amino acid and XRCC1 C-terminal position BRCT interaction was identified The results showed that the interaction sites were identified by immunoprecipitation method. The function of APTX in the repair of DNA damage is related to the repair of DNA damage in a lock. The function of L-APTX is related to the repair of DNA damage in a lock. The function of L-APTX is related to the repair of DNA damage in a lock. A system of polymerase-3'-phosphatase(PNKP), DNA polymerase beta, DNA ligase III and protein components necessary for radical removal and repair was established. 45mer and 2mer are complementary to each other. The ABI 3100 sequencer is used to reconstruct the DNA of 2 locks. The repair of 1 lock DNA is carried out. The next step is to increase the efficiency of DNA repair by XRCC1. XRCC1 generation L-APTX enhancement XRCC1 generation efficiency enhancement The results showed that L-APTX had the activity of PNKP isozyme-3'-phosphatase.

项目成果

Igarashi S., et al.: "Inducible PC12 cell model of Huntington's disease shows toxicity and decreased histone acetylation."Neuroreport. 14. 565-568 (2003)

Igarashi S. 等人：“亨廷顿舞蹈症的诱导型 PC12 细胞模型显示出毒性和组蛋白乙酰化降低。”Neuroreport。

Sano Y., et al.: "Aprataxin, the causative protein for EAOH, is a nuclear protein with a potential role as a DNA repair protein"Ann.Neurol. 55. 241-249 (2004)

Sano Y. 等人：“Aprataxin 是 EAOH 的致病蛋白，是一种核蛋白，具有作为 DNA 修复蛋白的潜在作用”Ann.Neurol。