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標識ポリオウイルス高感度イメージングによる血液脳関門通過機構の解析

使用标记脊髓灰质炎病毒高灵敏度成像分析血脑屏障通过机制

基本信息

批准号：
16017224
负责人：
大岡静衣
金额：
$ 8.19万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16017224/
关键词：
ポリオウイルス血液脳関門イメージング

项目摘要

蛍光色素succinimidyl esterによるポリオウイルス(PV)の直接標識に成功した。運動神経初代培養細胞軸索における標識PVの逆行性輸送の共焦点顕微鏡下リアルタイム観察に成功した。この結果は、PVのリアルタイム観察系を確立できたことを示す。BBB血管内皮細胞のPV透過機構を検討するためのin vitro系の確立に成功した。トランスウェル上にCD155非発現マウス脳血管内皮細胞を培養し、タイトジャンクションを形成させた後、蛍光標識PVまたは蛍光標識transferrin(Tf)を管腔側に添加し、基底膜側から検出される蛍光強度を測定することにより、PVまたはTfの透過性を検討した。その結果、BBBの透過性が高いことが知られているTfと同様に、PVの透過性は圧倒的に高かった。これらの結果から、PVはCD155非依存的にBBBを効率よく透過することを示唆することができた。PVのBBB透過がエンドソームを介しているのかどうかを明らかにするため、マウス脳血管内皮細胞において、蛍光標識PVと他の蛍光標識マーカー分子との局在を、共焦点顕微鏡によりリアルタイム観察した。PVがTf又はdextranと同一小胞で輸送される様子が観察された。一方、PVはraftのマーカーであるcholera toxin subunit Bとは共局在していなかった。この結果から、PVはCD155非依存的にエンドサイトーシスされてdextran又はTfを含むエンドソームに入るが、raftとは相互作用しないことが示唆された。またマウス脳血管内皮細胞を用いた非標識PVと標識Tfの取り込み競合実験において、PVの存在によりTfの取り込みが低下した。これらの結果から、PVはTfと共通した経路を介してCD155非依存的にエンドサイトーシスされることが示唆された。

The direct identification of fluorescent pigment succinimidyl ester (PV) was successful. The retrograde transport of PV was successfully observed under confocal microscope. The result is that the PV system is established. The study of PV transmission mechanism in BBB vascular endothelial cells was successfully established. CD155 is not detected in the culture of vascular endothelial cells. After the formation of the cell culture medium, the light marker PV and the light marker transferin (Tf) are added to the lumen side and the basement membrane side. The light intensity is measured. The transmittance of PV and Tf is discussed. As a result, BBB permeability is high, Tf is high, PV permeability is high, and PV permeability is low. The result is that the CD155 is independent of the BBB. PV and BBB can be detected by confocal microscopy, which can be used to detect the presence of PV and other molecules in vascular endothelial cells. Tf and dextran transport in the same cell. On the one hand, PV raftのー Cholera toxin subunit B is in full swing. As a result, PV CD155 is independent of the host and host, and the host interacts with the host. The vascular endothelial cells are not identified by PV, but by Tf. The result of this is that Tf is not a common circuit, and CD155 is not a dependent circuit.