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抗原特異的メモリーT細胞サブセットの形成維持機構に関する研究

抗原特异性记忆T细胞亚群形成及维持机制研究

基本信息

批准号：
16043241
负责人：
西村仁志
金额：
$ 3.78万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

CD30L遺伝子欠損(KO)マウスにListeria monocytogenes EGD株1x10^4cfuを腹腔内に感染させ、経時的に臓器内菌数を測定した。抗原特異的メモリーCD8T細胞の検出は、L.monocytogenes由来listeriolysin 0(LL0)_<91-99>のペプチドを用いたH-2K^dテトラマー染色およびIFN-γの細胞内染色により行った。感染BALB/cマウスからメモリーCD8T細胞を分離し、抗マウスCD30モノクローナル抗体で刺激し、ケモカインレセプターの発現を調べた。感染後12週目にそれぞれのマウスに致死量のL.monocytogenes 1x10^6cfuを感染させ、2日目の臓器内菌数を測定した。感染後1週目のエフェクターの時期において、いずれの臓器においてもLL0_<91-99>特異的CD8T細胞の出現頻度には差異が認められなかった。しかしながら、感染後6週目のメモリーの時期において、CD30LKOマウスの非リンパ組織でTEM(LL0_<91-99>-H2K^<d+>CD62L^-CD44^+ CD8^+)の著しい集積が認められたがリンパ組織ではTCM(LL0_<91-99>-H2K^<d+>CD62L^+CD44^+ CD8^+)が減少していた。感染後12週目を経ると、CD30LKOマウスで脾臓、リンパ節内のLL0_<91-99>特異的メモリーT細胞の減少が認められた。また、再感染防御能を調べたところ、コントロールマウスに比較して、CD30LKOマウスにおいて再感染防御能が低かった。最後にCD30L/CD30からのシグナルによるTCM細胞産生の機序を調べるために、メモリーCD8T細胞をin vitroで抗CD30抗体で刺激したところ、CCR7遺伝子の発現が高まった。以上の結果からCD30Lによる刺激がTEMからTCMへの分化に関与し、その機序としてCD30L/CD30からのシグナルがCCR7の発現を誘導する可能性が考えられる。

CD30L strain was detected by PCR. Listeria monocytogenes EGD strain 1x10^4cfu was detected by PCR. Antigen-specific CD8 T cell detection, L.monocytogenes derived from listeriolysin 0(LL0)_<91-99>selection, H-2K^d cell staining and IFN-γ intracellular staining. CD8 T cells infected with BALB/c were isolated and anti-CD30 antibodies were used to stimulate and modulate the development of CD8 T cells. The lethal dose of L.monocytogenes was 1x10^6 cfu at 12 weeks after infection, and the number of bacteria in the organs was determined at 2 days after infection. 1 week after infection<91-99>, the frequency of CD8-specific T cells was significantly different. During the period of disappearance and disappearance 6 weeks after infection, the significant accumulation of TEM(LL0_<91-99>-H2K^<d+>CD62L^-CD44^+ CD8 ^+) in the non-dense tissue of CD30LKO has been recognized, but the dense tissue of TCM(LL0_-<91-99>H2K^<d+>CD62L^+CD44^+ CD8^+) has been reduced. 12 weeks after infection, CD30 LKO cells decreased in the spleen and lymph nodes<91-99>. CD30 LKO has a low reinfection defense capability. Finally, CD30L/CD30L/CCR7 gene expression is highly regulated by CD8 T cells in vitro stimulated by anti-CD30 antibodies. These results suggest that the mechanism of CD30L/CD30 stimulation for the differentiation of TEM and CCR7 may be involved in the induction of CCR7.