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ラフトからのエンドサイト-シスとシグナル伝達

筏的内吞作用和信号转导

基本信息

批准号：
16044234
负责人：
田中嘉孝
金额：
$ 3.97万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、細胞膜に加えtrans-Golgi network(TGN)あるいはリサイクリングエンドソームのラフトに局在し、N末端の疎水性アミノ酸領域とC末端に付加されたGPIの2ケ所で膜に結合するユニークなトポロジーを有する蛋白質、BST2、のラフト局在化機構及びエンドサイトーシス機構の解析を通して、細胞膜からTGNあるいはリサイクリングエンドソームへのラフトを介したメンブレントラフィックの分子制御機構を解明することを目的としている。BST2は、HeLa細胞を含む種々のヒト由来癌細胞に発現し、その局在は細胞膜とTGNあるいはリサイクリングエンドソームであった。さらに、これら全てのコンパートメントにおいて、BST2はTritonX-100不溶性画分、所謂ラフトに存在し、これらコンパートメント間をリサイクルしていることが判明した。このようなラフト局在性からBST2の細胞膜からのエンドサイトーシスはクラスリン非依存性の可能性が予測されたが、BST2の細胞膜からのエンドサイトーシスはダイナミンのドミナントネガティブ変異体の発現及びK^+-depletionにより阻害され、BST2はクラスリン依存的な機構によりエンドサイトーシスされることが示唆された。さらに、BST2の様々な変異体を安定発現させたNRK細胞を構築し、BST2の局在及びエンドサイトーシスに必要な領域を検討した結果、GPI領域はラフトへの局在化には必要であったが、BST2の細胞内局在及び動態には必要ではなく、N末端細胞質領域、特に6番目と8番目のチロシン残基がエンドサイトーシスに必要であることが判明した。また、両チロシン残基のエンドサイトーシスシグナルとしての重要性は、Yeast two-hybrid法によるAP-2のμ2サブユニットとの結合に必要であったという結果からも明らかとなった。このように、BST2は一般的なTyrosine-based motif(YXXΦ)とは異なる新たなエンドサイトーシスシグナルを介して細胞膜からクラスリン依存性の機構によりエンドサイトーシスされることが判明した。

In this study, we analyzed the protein, BST2, protein and protein binding mechanism of the GPI in the cell membrane trans-Golgi network(TGN). The protein binding mechanism of the GPI in the cell membrane trans-Golgi network was analyzed. Cell membrane is the most important part of the molecular control mechanism. BST2, HeLa cells contain seeds that originate from cancer cells, and the cells are isolated from each other. BST2 is Triton X-100 insoluble, so called Triton X-100 insoluble, so called Triton X-100 insoluble. The possibility of the independence of the cell membrane of BST 2 was predicted, and the cell membrane of BST 2 was predicted to be independent of the cell membrane of BST 2. The cell membrane of BST 2 was predicted to be independent of the cell membrane of BST 2. In addition, BST2 is stable in the development of NRK cell construction, BST2 in the region and the necessary domain of the cell structure, GPI domain in the region and the necessary domain, BST2 in the cellular structure and the dynamic domain in the region and the necessary domain, N-terminal cytoplasmic domain, special 6 - 8-terminal residue in the cell structure and the necessary domain. The importance of the Yeast two-hybrid method for the synthesis of AP-2 and μ2 residues is essential. BST2 is a typical Tyrosine-based motif(YXXΦ) and a novel mechanism for cell membrane dependence.