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巨大RNA-タンパク質複合体vaultの構造に基づいた機能解明

基于巨型RNA-蛋白质复合体穹窿结构的功能阐明

基本信息

批准号：
16048216
负责人：
田中秀明
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048216/
关键词：
vault RNA-蛋白質複合体 X線結晶構造解析核膜孔複合体

项目摘要

1986年に米国UCLAのRomeらのグループによってラット肝臓より単離されたvaultは3種類の蛋白質と1種類のRNAによって構成されており、分子量約13MDa、サイズが約34×60nmでウィルスを除けば今日までに報告されている中では最大のRNA-蛋白質複合体である。ほとんどの粒子は細胞質内に存在し、全体量の5%程度が核膜孔複合体(NPC)とその周辺に局在することは知られているが、発見から18年以上を経た現在もなお詳細な機能は明らかになっていない。したがって、我々はvaultを構成成分にばらすことなく生体内に存在するそのままの状態で結晶化し、X線結晶構造解析によって粒子全体の立体構造を原子レベルで解明することにより、分子の形からvaultの本質的な機能解明に迫ることを目的として研究を行った。出発材料としては量も良く研究されているラット肝臓を用いた。我々はすでにポリエチレングリコールを沈澱剤として用いた結晶化条件で9Å分解能の反射を示す正方晶系の結晶を得ていたが、条件をさらに最適化することで空間群P1、格子定数α=440.9Å、b=600.8Å、c=635.7Å、α=67.1°、β=77.7°、γ=70.0°の新しいタイプの結晶を得た。この結晶は放射光施設SPring-8の生体超分子専用ビームラインBL44XUにおいて最高で4.5Å分解能の反射を示す良質の結晶であった。したがって、現在はこの結晶を用いて構造解析を進めており、すでに10Å分解能のNativeデータとMIRで位相決定を行うために必要な重金属誘導体の回折強度データは得ている。

In 1986, UCLA's Rome protein complex was isolated from three types of vault and one type of RNA. The molecular weight was about 13MDa, and the protein was about 34×60nm. Today, it is reported that it is the largest RNA-protein complex in China. The nuclear pore complex (NPC) exists in the cytoplasm of the particles, and the total amount is 5%; the peripheral part of the particle is in the middle of the cell, and the peripheral part of the particle is in the middle of the cell. The composition of the vaults and the state of existence in the organism are crystallized and X-ray crystal structure analyzed. The three-dimensional structure of the particles and the atomic structure are explained. The molecular form and the nature of the vaults are explained. The research on the development of new materials and new technologies is very important. The crystallization conditions of the tetragonal crystal system are optimized according to the space group P1, lattice number α=440.9 °, b=600.8 °, c=635.7 °, α=67.1°, β=77.7° and γ=70.0°. This crystal emits light and uses SPring-8 as a biological supramolecular molecule. The highest decomposition energy is 4.5 nm. The reflection energy shows that the crystal has good quality. The structure analysis of the crystal structure is carried out in order to determine the phase of the decomposition energy of the heavy metal inducer.