MARCKS及び類縁蛋白質のフレキシブルな蛋白質・脂質間相互作用様式の解明

阐明MARCKS及相关蛋白灵活的蛋白-脂质相互作用模式

• 批准号: 16048220
• 负责人: 山内 英美子
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16048220/
• 关键词: 質量分析; H; D交換; MARCKS

構造をとらないタンパク質MARCKSおよびその類縁タンパク質が、複数の異なるターゲットとの結合に際し、どのような結合様式をとるのかを明らかにするため、質量分析を用いたH/D交換-MS/MS解析による結合部位の詳細なマッピング、また脂質膜及びアクチンとの複合体の結晶構造解析を試みた。それぞれのターゲットとの結合領域を探索するため、MARCKSのeffector domainの中から全長、及び各部分を含むいくつかのペプチドを作成し、それぞれ、カルモジュリン、リン脂質膜、アクチンと結合した際の相互作用部位を、H/D交換反応後、エレクトロスプレーイオン化、ハイブリッド型質量分析計を用いた-MS測定、MS/MS測定により解析を行った。その結果、異なるターゲットに対して、コアとなる結合領域は、全く同一では無いことが示唆された。また、今回行った同一測定条件においては、重水素交換後のペプチドは、異なるターゲットにより、部分的に異なったMS/MSスペクトルを示した。また、リン脂質膜との結合については、そのリン脂質の組成によっても結合様式が異なることが示唆された。一方、これらの測定方法は、その測定条件、温度、時間などのコントロールが難しく、他の衝突条件などの検討も必要であることが明らかとなった。これらの知見を元に、effector domainの中から作成したいくつかのペプチドについて、現在、リン脂質、特にアクチンとの複合体の結晶化を試みている。

In this paper, we use the combination of MARCKS and MS/MS to analyze the connection between the two parts of the body, the number of parts, the number of joints, the number of joints. An analytical test was made for the analysis of the lipid membrane and the complex. The purpose of this paper is to explore the whole length of MARCKS and the whole length of each part of effector domain in combination with the field exploration, and the contents of each part of the membrane, the membrane, the interaction site, and so on. The quantitative analysis plan is used for quantitative analysis, which is based on the measurement of MS and the determination of MS/MS. The results show that there are significant differences in the results, the results of the results, the results and the results. This time, the same test condition will be measured again. After the heavy water has been handed over, there will be a lot of trouble, and a part of it will show that you will MS/MS the same condition. The combination of lipid membrane and lipid membrane was used to form a combination of lipid membrane and lipid membrane to show that it was instigated by the combination of lipid membrane and lipid membrane. One party, the method of measurement, the condition of measurement, the temperature, the temperature and the temperature. You are aware of the fact that you have learned that the yuan and effector domain have been made to crystallize the complex, existing, fat and complex.