シナプス構成蛋白質の質量分析法によるリン酸化解析及び機能解析

质谱法对突触组成蛋白进行磷酸化分析和功能分析

• 批准号: 13780625
• 负责人: 山内 英美子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokushima (2002)The Institute of Physical and Chemical Research (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780625/
• 关键词: 質量分析; シナプス; リン酸化; 質量分析法; 神経

本研究の目的は、近年、蛋白質の構造解析に最も重要かつ効果的な手段の一つとなった質量分析法を用い、神経機能において情報伝達やネットワーク形成、神経伝達の可塑性に重要な役割を果たす神経シナプス結合部のシグナル伝達の未知の分子機構を解明するため、その集積蛋白質の同定を行い、神経細胞内局在、またそれらの分子間相互作用、リン酸化蛋白質の解析によるリン酸化ネットワークの解析によりシナプス及びシナプス形成におけるタンパク質機能とそのネットワークを解明することを目的としたものである。本年度は、昨年度に質量分析を用いて見い出された機能未知/新規シナプス構成タンパク質のうち、いくつかについて抗体を作製し、そのシナプス後肥厚への局在を確認を行っている。また、シナプスに局在がみられ、さらにリン酸化が見られた既知蛋白質の一部に関して、部位特異的リン酸化抗体を作製し、神経系培養細胞や、ラット脳神経海馬の初代培養細胞系における軸索伸張・シナプス形成過程における神経細胞内局在の解析を蛍光免疫染色により行った。その結果、シナプス形成過程で部位特異的リン酸化型分子種の局在が、非リン酸化型分子種と異なる局在パターンを示すことが明らかとなった。またさらに、前シナプス、シナプスを形成する前段階である成長円錐の構成成分の同定を行った。その結果、新規のものを含め、これまでプレシナプス、成長円錐いずれにもこれまで報告されていない蛋白質が同定された。

The purpose of this study is to investigate the most important methods for protein structure analysis in recent years, including the use of mass spectrometry, the formation of neural function information, the plasticity of neural expression, the important function of protein structure analysis, the identification of protein accumulation, the intracellular structure of neural cells, and the unknown molecular mechanism of protein expression. The molecular interaction, protein analysis, protein function, protein production, protein analysis, protein production, protein production, This year, the quality analysis of the previous year was carried out in the presence of unknown functions/new regulations. The composition of the quality analysis was carried out in the presence of antibodies. The results of the quality analysis were confirmed. In addition, in the process of protein development, protein acidification was observed in a part of the known protein, and site-specific protein acidification antibodies were produced. In the process of axonal extension and protein formation in cultured cells of the hippocampus, the intracellular structure of the brain was analyzed by photoimmunostaining. As a result, site-specific acidified molecular species are present in the formation process, and non-acidified molecular species are present in the formation process. The composition of the growth cone is the same as that of the previous stage. The results, new rules and regulations include:

项目成果

Konishi, H., et al.: "Phosphorylation sites of protein kinase C delta in H2O2-treated cells and its activation by tyrosine kinase in vitro"Proc Natl Acad Sci U S A.. 98(12). 6587-6592 (2001)

Konishi, H. 等人：“H2O2 处理的细胞中蛋白激酶 C δ 的磷酸化位点及其体外酪氨酸激酶的激活”Proc Natl Acad Sci U S A.. 98(12)。

Yamamoto H, et al.: "Phosphorylation of microtubule-associated protein tau by Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase II in its tubulin binding sites"Arch Biochem Biophys. 408・2. 255-262 (2002)

Yamamoto H 等人：“Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶 II 在其微管蛋白结合位点磷酸化微管相关蛋白 tau”，Arch Biochem Biophys，408·2（2002 年）。