MARCKS及び類縁蛋白質のフレキシブルな蛋白質・脂質間相互作用様式の解明

阐明MARCKS及相关蛋白灵活的蛋白-脂质相互作用模式

• 批准号: 17048017
• 负责人: 山内 英美子
• 金额: $ 4.03万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17048017/
• 关键词: 質量分析; MARCKS; X線結晶構造解析; H; D交換

MARCKSは、生体内で細胞運動や膜輸送など様々な状況に応じて細胞膜、アクチン細胞骨格、カルモジュリンなど複数のターゲットと可逆的に相互作用する蛋白質である。またこれらの相互作用は全て一つのドメイン、effector domain上で機能し、ミリスチル化及びリン酸化など翻訳後修飾による制御を受けている。我々はMARCKSが、上記のような"natively unfolded protein"でありながら、その構造特徴を生かし、そのターゲットの一つ、カルモジュリンと大部分延びたままソフトな結合を行っていることをX線結晶構造解析により明らかにしている。本研究は、このようなMARCKSのeffector domainが、複数のターゲットとどのような結合様式をとるのかを明らかにすることを目的としている。MARCKSの脂質膜、アクチンとの必須結合領域を探索するため、MARCKSのeffector domainの中から複数のペプチドを選択、作成し、それぞれ、カルモジュリン、リン脂質膜、アクチンと結合した際の相互作用部位の解析を行った結果、カルモジュリンの場合と異なり、アクチン、脂質膜との結合には、比較的effector domain全長が関与することが示唆された。上記の知見を元に、effector domainの中から作成したいくつかのペプチドについて、リン脂質、アクチンとの複合体の結晶化を試みた。様々な結晶化条件を検討した結果、複数のバリエーションのMARCKSペプチドを用いてアクチンとの複合体の結晶化に成功した。それらの結晶は、母液に対する安定性、分解能がペプチドにより異なり、それは重水素交換-質量分析法で得られた知見とほぼ一致した。得られた結晶を、Spring-8及び高エネルギー加速器研究機構のビームラインで測定を行った。現在3.6オングストロームの分解能のデータを得ている。得られた反射は、分子置換法により初期構造を得ることができた。

MARCKS is a protein that interacts with cell membranes, skeletal cells, and cells in a number of ways, including reversible cell transport and cell movement in vivo. The interaction between the two groups is completely controlled by the function, polarization and post-modification of the effector domain. I wrote MARCKS as "natively unfolded protein," which is characterized by structural features, structural characteristics, and most of the extended structural combinations. In this study, the effector domain of MARCKS is divided into two parts: the first part is the effector domain, the second part is the effector domain, and the third part is the effector domain. MARCKS lipid membrane, lipid membrane, lipid membrane and binding must be explored in the field, MARCKS effector domain in the selection of a plurality of options, preparation, preparation, separation, lipid membrane, lipid membrane and binding interaction site analysis results, the case of a lipid membrane, lipid membrane and binding, comparison of the length of the effector domain and the relationship between. Note that the crystallization of the complex of lipid and starch in the knowledge element and effector domain has been tried. As a result, the crystallization of the complex was successfully carried out with the help of the MARCKS. The stability and decomposition energy of the crystals and mother liquor are consistent with those of the heavy water element exchange-mass analysis method. The measurement of the crystal, Spring-8 and high temperature accelerator research institutions was carried out. Now 3.6 ° C, the decomposition of the file can be done. The first step is to replace the first step.

项目成果

CFBP is a novel tyrosine-phosphorylated protein that might function as a regulator of CIN85/CD2AP

• DOI: 10.1074/jbc.m605693200
• 发表时间: 2006-09-29
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Konishi, Hiroaki;Tashiro, Kyoko;Taniguchi, Hisaaki
• 通讯作者: Taniguchi, Hisaaki

Suppression of the ligand-mediated down-regulation of epidermal growth factor receptor by Ymer, a novel tyrosine-phosphorylated and ubiquitinated protein

• DOI: 10.1074/jbc.m604184200
• 发表时间: 2006-08-25
• 期刊: JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY
• 影响因子: 4.8
• 作者: Tashiro, Kyoko;Konishi, Hiroaki;Taniguchi, Hisaaki
• 通讯作者: Taniguchi, Hisaaki

Myosin-Va regulates exocytosis through the submicromolar Ca2+-dependent binding of syntaxin-1A.

• DOI: 10.1091/mbc.e05-03-0252
• 发表时间: 2005-10
• 期刊: Molecular biology of the cell
• 影响因子: 3.3
• 作者: Michitoshi Watanabe;Kazushige Nomura;A. Ohyama;R. Ishikawa;Y. Komiya;K. Hosaka;E. Yamauchi;H. Taniguchi;N. Sasakawa;K. Kumakura;T. Ushiki;O. Sato;M. Ikebe;M. Igarashi