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天然由来シグナル伝達阻害物質の探索と医薬への応用

寻找天然来源的信号转导抑制剂及其在医学上的应用

基本信息

批准号：
16073217
负责人：
梅澤一夫
金额：
$ 18.11万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2007
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度はNF-κB阻害物質(-)-DHMEQの標的分子を解明することができた。1)(-)-DHMEQの標的分子の解明。私達が発見した(-)-DHMEQは様々な病態動物モデルで強い治療効果を示した。しかし、その標的分子は未解明であった。今回、(-)-DHMEQはp65に直接結合して、DNA結合能を失わせることを明らかにした。recombinant p65に対して(-)-DHMEQは1:1量で、in vitroでDNA結合を抑制した。SPRにおいてresponseがあり、MALDI-TOF MSにおいて1:1の共有結合が示された。さらに特定のアミノ酸に結合することもわかった。さらに制限プロテアーゼを用いたprotein mass fingerprintを応用したMALDI-TOF MS測定からも特定のアミノ酸への結合が示された。以上より、(-)-DHMEQはNF-κB構成因子の特定のアミノ酸に共有結合することでNF-κBのDNA結合能を抑制することがわかった。この結果は、より有効なNF-κB阻害剤創製の指標となると考えられる(論文投稿中)。2) conophyllineの標的分子ARL61Pの機能を調べるためにSiRNAによるノックダウンマウスを作成した。3) 新しいNF-κB阻害剤の発見。微生物よりNO産生阻害活性、NF-κB阻害活性のある既知物質を微生物から得た(論文準備中)。4) (-)-DHMEQを光学分割する方法として酵素リパーゼを用いる方法を見出したが、その溶液をかえることでより効率よく光学活性体が得られるようになった。5) (-)-DHMEQによる癌細胞の転移・浸潤能の抑制。高転移性乳癌細胞であるMDA-MB-231細胞において(-)-DHMEQは、CXCR4の発現を抑制することにより、転移部位へのchemotaxisを抑制するほか、autocrine機構により自身の遊走・浸潤能を低下させることが示唆された。

This year, the target molecule of NF-κB inhibitor (-)-DHMEQ was identified. 1) Explanation of the target molecule of (-)-DHMEQ. (-)-DHMEQ-しかし、その标的分子は未解明であった。Now,(-)-DHMEQ is p65 binding directly, DNA binding energy is lost. Recombinant p65 is a 1:1 inhibitor of DNA binding in vitro. SPR response, MALDI-TOF MS response 1:1 and total combination. This is the first time I've ever seen a woman. In addition, MALDI-TOF MS was used to determine the protein mass fingerprint of the target protein. The above,(-)-DHMEQ, NF-κB constitutive factor specific acid consensus binding, and NF-κB DNA binding inhibition. The results show that NF-κB inhibitors can be used as indicators for the creation of NF-κB inhibitors (paper submission). 2)The target molecule ARL61P is a functional modulator of RNA. 3)A new NF-κB inhibitor was developed. NO production inhibition activity and NF-κB inhibition activity of microorganisms are known substances obtained by microorganisms (thesis preparation). 4)(-)-DHMEQ optical segmentation method: enzyme separation method: solution separation method: optically active substance separation method: 5)(-)-DHMEQ can inhibit migration and invasion of cancer cells. The expression of CXCR4 in MDA-MB-231 cells was inhibited by (-)-DHMEQ, and the chemotaxis in the migration site was inhibited by autocrine mechanism.