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RNAiを用いた新しいがん治療法の開発

利用 RNAi 开发新的癌症治疗方法

基本信息

批准号：
17016047
负责人：
蓮輪英毅
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016047/
关键词：
RNAi がんレンチウイルス

项目摘要

マイクロインジェクション法によりトランスジェニックマウスを作製することで有効性を確認できたEGFPに対するRNAiベクターについて、レンチウイルスベクターに導入し培養細胞を用いて検討した。その結果、siRNAの発現とRNAi効果を確認することができ、その有用性が確認できた。ただし、レンチウイルスを用いた場合、染色体に組み込まれることでベクターの安定化ができる反面、siRNAの発現量は一過性に導入した場合にくらべ1/10以下であることがわかり、少量で効果の高いsiRNAを導入することが絶対必要条件であることがわかった。一方で、siRNAによるオフターゲット効果やPKRの活性化による非特異的な反応が起こることが示唆されている。このことは、RNAiで遺伝子治療を考えた時に最も注意しなければいけない点である。siRNAの発現に一般に用いられているpolIIIプロモーターは全身性にsiRNAの発現を誘導することから、組織特異的な発現を誘導できるpolIIプロモーターを用いることで非特異的な反応を抑えたベクターの開発を試みた。その結果、これまでpolIII系でsiRNAの発現が可能であったものの1部が発現できなかったりしたことから、さらに改良を加えることでpolIIによる発現系を確立させる必要がある。ただ、polII系が使えるということが明らかとなった点は非常に大きな知見であり、新しいツール開発への1歩を踏み出せたと考えている。マウス個体を用いた研究としては、レンチウイルスを用いて作製したRNAiトランスジェニックにおけるRNAi効果について胎盤組織を用い検討したが、顕著なRNAi効果は観察されなかった。原因としては上述のようにsiRNAの十分な発現量が得られなかったことが考えられ、この結果からもレンチウイルスを用いたRNAiベクター系に関しては今後さらなる検討を要する部分である。

This method is effective to confirm the RNAi response to EGFP and to introduce it into cultured cells. The results, siRNA discovery and RNAi effects were confirmed. In the case of chromosome organization, stabilization, and transient introduction of siRNA, the amount of siRNA produced is less than 1/10 of the total amount of siRNA introduced, and a small amount of siRNA is introduced. The expression of siRNA in a non-specific manner is dependent on the activation of PKR. The most important thing to note when investigating RNAi gene therapy siRNA expression is induced in general and in tissue-specific ways by polIII. siRNA expression is induced in general and in non-specific ways. The results, polIII system, siRNA discovery is possible, part 1 of the discovery, improvement, and polII system discovery is necessary.ただ、polII系が使えるということが明らかとなった点は非常に大きな知见であり、新しいツール开発への1歩を踏み出せたと考えている。The study on the use of human placenta tissue and the study on the use of human placenta and human placenta. The reason for this is that the amount of siRNA detected in the study is related to the use of RNAi in the study.