RNAiを用いた新しいがん治療法の開発

利用 RNAi 开发新的癌症治疗方法

• 批准号: 17016047
• 负责人: 蓮輪 英毅
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016047/
• 关键词: RNAi; がん; レンチウイルス

マイクロインジェクション法によりトランスジェニックマウスを作製することで有効性を確認できたEGFPに対するRNAiベクターについて、レンチウイルスベクターに導入し培養細胞を用いて検討した。その結果、siRNAの発現とRNAi効果を確認することができ、その有用性が確認できた。ただし、レンチウイルスを用いた場合、染色体に組み込まれることでベクターの安定化ができる反面、siRNAの発現量は一過性に導入した場合にくらべ1/10以下であることがわかり、少量で効果の高いsiRNAを導入することが絶対必要条件であることがわかった。一方で、siRNAによるオフターゲット効果やPKRの活性化による非特異的な反応が起こることが示唆されている。このことは、RNAiで遺伝子治療を考えた時に最も注意しなければいけない点である。siRNAの発現に一般に用いられているpolIIIプロモーターは全身性にsiRNAの発現を誘導することから、組織特異的な発現を誘導できるpolIIプロモーターを用いることで非特異的な反応を抑えたベクターの開発を試みた。その結果、これまでpolIII系でsiRNAの発現が可能であったものの1部が発現できなかったりしたことから、さらに改良を加えることでpolIIによる発現系を確立させる必要がある。ただ、polII系が使えるということが明らかとなった点は非常に大きな知見であり、新しいツール開発への1歩を踏み出せたと考えている。マウス個体を用いた研究としては、レンチウイルスを用いて作製したRNAiトランスジェニックにおけるRNAi効果について胎盤組織を用い検討したが、顕著なRNAi効果は観察されなかった。原因としては上述のようにsiRNAの十分な発現量が得られなかったことが考えられ、この結果からもレンチウイルスを用いたRNAiベクター系に関しては今後さらなる検討を要する部分である。

将EGFP的RNAi载体引入了慢病毒载体中，并使用培养的细胞检查了通过微注射产生转基因小鼠的有效性。结果，确认了siRNA的表达和RNAi的作用，并确认了其实用性。但是，当使用慢病毒时，可以通过掺入染色体中来稳定载体，但发现与瞬态引入相比，siRNA的表达水平小于1/10，并且在少量sirna中引入高效的siRNA是绝对必须的。另一方面，已经提出，由于siRNA和PKR的激活引起的脱靶效应，发生了非特异性反应。在考虑使用RNAi基因治疗时，这是最重要的事情。由于通常用于siRNA表达的poliii启动子系统地诱导siRNA表达，因此我们尝试开发一种载体，该载体通过使用polii启动子来抑制非特异性反应，该反应可以诱导组织特异性表达。结果，尽管到目前为止，尚未表达siRNA在poliii系统中表达，但尚未表达polii系统的一部分，因此需要进一步的改进才能使用polii建立表达系统。但是，很明显可以使用Pol II系统是一个巨大的见解，我们认为它已经朝着开发新工具迈出了一步。作为使用小鼠个体的研究，使用胎盘组织研究了RNAi对使用慢病毒产生的RNAi转基因的影响，但未观察到明显的RNAi效应。原因是，如上所述，未获得足够的siRNA表达水平，从此结果中，将来需要对使用慢病毒的RNAi向量系统进行进一步研究。

项目成果

RNA工学の最前線

RNA工程的前沿

• 发表时间: 2005
• 作者: Eshima;K.et al.;蓮輪英毅
• 通讯作者: 蓮輪英毅