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哺乳類におけるRNAiの確立とRNAiを用いた受精機能の解析

哺乳动物 RNAi 的建立以及利用 RNAi 分析受精功能

基本信息

批准号：
14780625
负责人：
蓮輪英毅
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780625/
关键词：
RNAi siRNA トランスジェニックマウス EGFP polIII RNAポリメラーゼIIIプロモーター

项目摘要

哺乳類において、長いdsRNAを用いたRNAiは毒性があることや効果の持続性がないことなどから、毒性のないsiRNAを用いRNAiを持続的に作用させる実験系を立ち上げた。RNAポリメラーゼIIIプロモーターでsiRNAを発現することができるベクターシステムを構築し、先ずはRNAiの効果をin vitroで検討した。EGFPを標的としたRNAiベクターを作製し、EGFPが安定に発現したES細胞に導入してみたところ、十分なRNAi効果が観察され、EGFPの発現が抑制された。さらなる応用として、RNAiベクターを用いトランスジェニックマウスを作製し、"green mouse"におけるEGFPの発現を抑制させることに成功している。この遺伝子発現抑制効果は、初期胚、新生仔、成熟したマウスにおいて、ほぼすべての組織で観察された。しかしながら、このRNAi法はまだ完成されたとはいえず、一部のRNAiトランスジェニックマウスにおいてRNAi効果がマウスの成長と共に無くなったり、標的とする遺伝子のどの配列でRNAiを行なうか、というように克服しなければならない点もある。これらの点を克服するために、安定して遺伝子発現が抑制できる新しいベクターの開発が必要だと考えており、その第一歩として、新しいプロモーターの探索を行ない、すでにリボザイムの発現系で用いられたtRNAの内部プロモーターを用いることで、RNAi法の効率化が図れることを見いだした。また、ベクターに導入する配列を一部改変することで、ベクターを安定化することに成功した。このベクターを用い、卵子で発現している遺伝子に関してRNAiを行ない解析中である。

Mammals, long dsRNA, long dsRNA, long ds RNAi gene expression in vitro EGFP targets are controlled by RNAi, EGFP is stably detected by ES cells, and EGFP is inhibited by RNAi. This is a successful attempt to suppress the occurrence of EGFP in the "green mouse" environment. The results of inhibition of embryo development include early embryo, newborn, mature embryo and mature embryo. The RNAi method is complete, part of the RNAi process is complete and part of the RNAi process is complete. The first step in the exploration of RNAi development is to use tRNA to inhibit RNAi gene expression. The second step is to use RNAi to inhibit RNAi gene expression. A partial change in the layout of the system was made and the system was stabilized. In the process of analysis of RNAi, egg development and gene expression are discussed.