神経節疾患の原因となるpre-mRNAスプライシング異常症の分子病態研究

导致神经节疾病的前体mRNA剪接异常的分子病理学研究

• 批准号: 17026016
• 负责人: 大野 欽司
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17026016/
• 关键词: Intronic splicing silencer破断遺伝子変異; Exonic splicing enhancer破断遺伝子変異; 既認可薬によるスプライシング制御; 遺伝子; 蛋白質; 神経科学; 脳・神経; 脳神経疾患

(1)先天性筋無力症候群の原因遺伝子のひとつであるアセチルコリンレセプターαサブユニット遺伝子(CHRNA1)のイントロン2の3'末端から8塩基目のGからAへの塩基置換がpolypyrimldine tract binding protein(PTBP1)、及び、hnRNP Hとの結合を破断し、下流のexon P3Aがsplicing時に認識をされ、翻訳産物が機能を有さないexon P3A(+)mRNAのみを産生することを実証した。この遺伝子のspiicingを補正する既認可薬剤のスクリーニングを行い、有効な薬剤を同定した。この薬剤はPTBP1プロモータ領域に働き、PTBP1の発現星を増加させることにより効果を示すことを同定し、薬剤反応cis-elementの同定も行なった。(2)家族性痙性対麻痺の原因遺伝子のひとつであるspastin(SPG4)の33種類の一塩基置換に対して、ミニジーンを用いて、exonic splicing enhancer破断変異のスクリーニングを行った。3種類の遺伝子変異は完全なexon skippingを惹起し、10種類の変異は不完全ながらexon skippingを起こしていた。これら3種類の遺伝子変異部位に結合をするsplicingトランス因子の同定を候補分子群を用いてスクリーニングを行い、ASFが1種類の変異部位に結合することをHeLa細胞核抽出液を使って同定した。HeLa細胞に過剰発現をさせて精製をしたASFと正常SPG4配列の結合実験にて弱い結合を同定した。

The main results are as follows: (1) the cause of congenital tendon insufficiency syndrome, the cause of congenital muscle weakness syndrome, the cause of congenital muscle weakness There is an exon P3A (+) mRNA machine that can make sure that you don't know how to make sure that you don't know what to do. It is recognized that the spiicing is correct, and that you can agree with each other. Do you want to know that the PTBP1 is the same as that of the PTBP1? (2) the causes of familial anaphylaxis, such as spastin (SPG4) 33 and so on, are based on the information system, information system, and exonic splicing enhancer system. 3. Exon skipping is not a complete problem, while 10 is not a full cause of exon skipping. The molecular population of the target gene was identified by the combination of the target splicing factor and the molecular cluster of the target gene, and that of the target HeLa was extracted from the cell nucleus of the target cell by the combination of the molecular cluster of the target gene and the molecular group of the target gene. HeLa cell screening results show that the normal SPG4 configuration of the ASF is consistent with that of the weak and weak ones.